水产品中4-己基间苯二酚的测定 高效液相色谱法（征求意见稿）.doc

Q/XT0001S—2010 Q/SOM ××××—×××× PAGE 2 PAGE 2 DBS37 山东省地方标准 DBS37/xxxx-2012 水产品中4-己基间苯二酚的测定高效液相色谱法 （征求意见稿） xxxx -xx-xx发布 xxxx-xx-xx实施 山东省卫生厅 发布 Q/QDSP0002S-2010 DBS37/xxxx-2012 I PAGE II 前??言 本标准严格按照食品安全国家标准编写要求进行编写。 本标准的附录为资料性附录。 本标准起草单位：山东省海洋水产研究所。 水产品中4-己基间苯二酚的测定高效液相色谱法 范围 本标准规定了水产品中4-己基间苯二酚的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于鱼、虾、蟹中4-己基间苯二酚的测定。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 原理 样品中的4-己基间苯二酚用乙腈提取，以乙腈饱和的正己烷除去脂肪，用高效液相色谱仪进行测定，外标法定量。 试剂和材料 所用试剂除另有规定外，均为分析纯。 试验用水应符合GB/T 6682中一级水的规定。 乙腈：色谱纯。 甲醇：色谱纯。 正己烷。 4-己基间苯二酚标准品：纯度≥98%。 4-己基间苯二酚标准贮备溶液：准确称取0.01 g（精确至0.000 1 g）4-己基间苯二酚，用甲醇溶解并定容至100 mL，配成浓度为100 μg/mL的标准贮备液，置4℃冰箱保存，保存期不超过 4-己基间苯二酚标准工作溶液：取4-己基间苯二酚标准贮备液，用乙腈稀释成浓度范围为0.01 μg/mL～0.5 μg/mL的标准工作溶液。 仪器和设备 高效液相色谱仪：配有荧光检测器。 离心机：7 000 r/min。 分析天平：感量0.000 01 g。 天平：感量0.01g。 超声波清洗器。 旋涡混合器。 50 mL塑料离心管。 具塞玻璃离心管：10 mL。 微孔滤膜：有机系，0.45 μm。 测定步骤 样品的制备 虾类去头、壳，蟹类去壳，取可食部分用高速分散匀质机匀浆，备用。如不能及时检测，-18℃以下冷冻保存备用 样品的提取 称取匀浆后的样品5 g（精确至0.01 g）于50 mL塑料离心管中，加乙腈15 mL，振摇混匀，超声提取15 min，4 000 r/min离心10 min，将提取液移至25 mL容量瓶中，残渣用8 mL乙腈重复提取1次，合并提取液于上述容量瓶中，加乙腈至25 mL刻度。 样品的净化 取2 mL提取液于10 mL具塞离心管中，加乙腈饱和的正己烷3 mL，旋涡混合30 s，4 000r/min离心10 min，弃去正己烷层，下层溶液过0.45 μm微孔滤膜后，供液相色谱分析。 测定 色谱参考条件 色谱柱：C18柱，150 mm × 4.6 mm（i.d.）；或性能相当者； 流动相：甲醇+乙腈+水（体积比为50+15+35）； 流速：1.0 mL/min； 柱温：40℃ 进样量：20 μL； 检测波长：激发波长280 nm，发射波长320 nm。 标准曲线的绘制 取4-己基间苯二酚标准工作液，分别取20 μL进样，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算线性方程。 液相色谱测定 在6.4.1色谱条件下对样品溶液进行测定，响应值应在仪器检测线性范围内。标准品保留时间参考值为：7.8 min （见附录A）。 空白试验 除不加试样外，均按6进行测定。 结果计算 试样中4-己基间苯二酚残留量以质量分数X计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示，按公式（1）计算。 ( SEQ 标准自动公式 \* ARABIC 1) 式中： X — 试样中4-己基间苯二酚残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； C — 试样溶液中4-己基间苯二酚的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； C0—空白溶液中4-己基间苯二酚的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V — 试样溶液体积，单位为 毫升（mL）； m — 试样质量，单位为克（g）。 结果保留三位有效数字。 灵敏度 本方法检出限为0.05 mg/kg；定量限为0.1 mg/kg。 准确度 本方法添加浓度为0.1 mg/kg～2.0 mg/kg时，回收率为70%~90%。 精密度 本方法批内相对标准偏差≤10%，批间相对标准偏差≤15%。 方法的线性范围 本方法的线性范围为0.01