发酵酒中尿素的测定方法 高效液相色谱法（征求意见稿）.doc

ICS FORMTEXT FORMTEXT X FORMTEXT FORMTEXT QB 中华人民共和国 FORMTEXT 轻工行业标准 FORMTEXT QB/T FORMTEXT XXXXX— FORMTEXT XXXX FORMTEXT FORMTEXT 发酵酒中尿素的测定方法 高效液相色谱法 FORMTEXT Determination of urea in fermented alcoholic beverage— High performance liquid chromatography FORMTEXT 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 FORMDROPDOWN FORMTEXT FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX发布 FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX实施 FORMTEXT 中华人民共和国工业和信息化部发布 QB/T XXXXX—XXXX PAGE \* MERGEFORMAT 1 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准按GB1.1-2009给出的规则起草。 本标准由全国食品发酵标准化中心提出并归口。 本标准起草单位： 。 本标准起草人：。 发酵酒中尿素的测定方法 高效液相色谱法 1 范 围 本标准规定了发酵酒中尿素的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于黄酒等发酵酒中尿素的测定。 本标准的检出限：0.024 mg/L。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规则和实验方法 3 原 理 采用9-羟基占吨衍生剂与发酵酒中的尿素进行衍生反应，尿素衍生产物具有荧光特性，经色谱柱分离后，荧光检测器测定，外标法定量分析。 4 试剂和溶液 除另有说明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 无水乙酸钠。 4.2 浓盐酸。 4.3 9-羟基占吨。 4.4 无水乙醇。 4.5 丙醇。 4.6 乙腈：色谱纯。 4.7 冰乙酸（≥99.0%）。 4.8 乙酸溶液（1.0%）：准确移取1.0 mL 冰乙酸至100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。 4.9 乙酸钠溶液（0.02 mol/L）：称取1.64 g无水乙酸钠溶解于1000 mL水中，用乙酸溶液（1.0%）将 4.10 盐酸溶液（1.5 mol/L）：移取6.2 mL的浓盐酸于50 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。 4.11 9-羟基占吨溶液（0.02 mol/L）：秤取0.1980 g 9-羟基占吨，用丙醇溶解并定容至50 mL，避光放置，于4 4.12 尿素标品：纯度≥99% 。 4.13 尿素标准储备液（1.0 mg/L）：准确称取0.1000 g尿素，用无水乙醇溶解并定容至100 mL。配制成的标准储备液于 4.14 标准工作液：准确吸取尿素标准储备液，用无水乙醇依次配制成5.00,10.00,20.00，40.00，100.00 μg/mL的系列标准工作溶液。配制成的标准工作溶液于4℃保存。 5 仪器和材料 5.1 高效液相色谱仪：配有荧光检测器。 5.2 pH计。 5.3 分析天平（精度0.1 mg）。 5.4 涡旋混合器。 5.5 带塞试管。 5.6 微孔过滤膜：孔径0.45 μm(有机系和水系)。 6 分析步骤 6.1 样品衍生 准确吸取样品2.0 mL，于10 mL容量瓶中，用无水乙醇（4.4）定容至刻度，混匀，取400 μL稀释后的样品，置于带塞试管中，加入100 μL盐酸溶液（4.10）、600 μL 9-羟基占吨溶液（4.11）混匀，室温避光衍生30 min，经0.45 μm有机系滤膜过滤，用于液相色谱测定。 6.2 参考色谱条件 6.2.1 色谱柱：C18色谱柱（250 mm×4.6 mm, 5 μm）或等效色谱柱。 6.2.2 柱温35℃。 6.2.3 检测波长： λex=213nm, λem=308nm 6.2.4 流速：1.0 mL/min。 6.2.5 进样体积：10 μL。 6.2.6 表1 梯度洗脱程序表 时