蛹虫草中喷司他丁的测定 液相色谱法征求意见稿）.pdf

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蛹虫草中喷司他丁的测定液相色谱法

1范围

本标准规定了测定蛹虫草中喷司他丁的液相色谱法。

本标准适用于蛹虫草子实体、菌丝体（干品）中喷司他丁的测定。

本方法检出限为1mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T12728食用菌术语

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1喷司他丁

Pentostatin

CAS号53910-25-1，分子式CHNO，分子量为258.27，结构式见图1。喷司他丁于1974年由

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Warner-Lambert公司从抗生链霉菌的发酵液中分离出来的一种天然的核苷类抗生素，对腺苷脱氨酶具

有极强的抑制效果，在临床治疗恶性肿瘤方面有广泛应用。但因其生产成本高、市售价格较为昂贵，

目前难以满足需求。2018年中国科学院上海植物生理生态研究所王成树研究团队首次发现，蛹虫草能

够高水平的合成具有抗癌活性的喷司他丁，这一发现为蛹虫草的抗癌活性提供了充分的分子证明。

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图1喷司他丁结构式

4原理

试样经超纯水提取、定容、离心后，取上清液过滤膜，经C高效液相色谱柱分离，依据保留时间

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定性，用外标峰面积定量。

5试剂和材料

除非另有规定，所有试剂均为分析纯，实验室用水符合GB/T6682中规定的三级水要求，色谱用

水符合GB/T6682中规定的一级水要求。

除非另有规定，所有试剂均为分析纯，实验室用水符合GB/T6682中规定的三级水要求，色谱用

水符合GB/T6682中规定的一级水要求。

5.1喷司他丁标准品（CAS：53910-25-1）:纯度≥98%。

5.22.5g/L乙酸铵：甲醇：乙腈（96:2:2）：2.5g乙酸铵定容至1000mL超纯水，混匀，过0.22μm

滤膜（5.5）。

5.3喷司他丁标准储备溶液：精确称量5.0mg喷司他丁标准品（5.2），用超纯水溶解并定容至50

mL，使用前配制。

5.4喷司他丁标准工作溶液：分别准确吸取一定量的喷司他丁标准储备液（5.4），用超纯水分别将

其稀释成浓度为10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL的工作溶液，使用前

配制。

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5.5滤膜（有机相）：0.22μm。

6仪器和设备

6.1液相色谱仪（带紫外检测器）。

6.2分析天平：感量0.1mg和感量1mg。。

6.3恒温水浴锅。

6.4粉碎机。

6.5离心机。

6.6加热型超声波粉碎机。

7测定方法

7.1试样处理

7.1.1蛹虫草子实体：取蛹虫草干品进行粉碎，过100目筛子，取筛下物样品0.5g（精确至0.01g），

加入超纯水80mL，70℃热提取1h，过滤，滤液暂存，离心（8800rpm，10min）去除不溶物，用超纯

水定容至100m