生物化学：第三章 蛋白质(3周3-4节) .pdf

上节内容回顾  多肽 肽键、氨基酸顺序、氨基酸残基 肽的pI计算 肽链的水解 肽的化学合成  蛋白质的结构 蛋白质结构层次的定义 蛋白质一级结构的研究内容 第三章主要内容 一．蛋白质概述 二．氨基酸(重点) 三．多肽（重点） 四．蛋白质的结构（重点） 五．蛋白质结构与功能（重点） 六．蛋白质的性质（重点） 七．蛋白质的分离纯化与鉴定（重点） (4) Cleavage of Peptide Chain 酶解法  蛋白水解酶（proteolytic enzymes）： 特异性水解多肽链 能预测获得小肽段数目及末端氨基酸种类  不同的蛋白水解酶有不同的水解特点  胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶等 胰蛋白酶（Trypsin）  最常用  水解Lys 和Arg 残基的羧基端  若断裂点另一氨基酸为Pro，会抑制水解？  专一性较强，水解速度快 糜蛋白酶（Chymotrypsin）  或称胰凝乳蛋白酶  碱性条件水解，pH8~9  Phe, Trp, Tyr 残基的羧基端，水解速度快。  Leu, Met, Asn, His 水解较慢。  若断裂点另一氨基酸为Pro，会抑制水解。  有一定的专一性。 胃蛋白酶（Pepsin ）  酸性条件水解，pH2，适用于二硫键位置确定  水解Phe, Trp, Tyr，Leu等的氨基端肽键  R1 = Pro，不水解  专一性较差，水解速度快 O O O O NH CH C NH CH C NH CH C NH CH C R1 R2 R3 R4 水解位点 Phe, Trp, Tyr，Leu等 (4) Cleavage of Peptide Chain 化学法  溴化氰水解法(Cyanogen bromide) 选择性切割Met羧基所形成的肽键。  特点：专一性强；产率高；条件温和； 较理想小肽段。 Mechanism for the Cleavage of a Peptide Bond by Cyanogen Bromide (To be continued) Mechanism for the Cleavage of a Peptide Bond by Cyanogen Bromide 高丝氨酸（homoserine） (The End) Why won’t cyanogens bromide cleave at cysteine residues? 常 用 多 肽 链 断 裂 方 法 的 选 择 性 (5) Edman Analysis of Peptide Chain  称Edman chemical degradation,又称PTH法。  N-端分析法  特点: 能不断重复循环，将肽链N-端氨基酸残基 逐一进行标记、解离和鉴定。  产物：PTH-amino acid, EtOAc 萃取，色谱鉴 定。  发展出氨基酸顺序自动分析仪。 适用于较小肽段（一般 50）的氨基酸顺序分析。 PTH 法 原 理