蚯蚓29肽抗菌活性分析以及基因在大肠杆菌中的表达的中期报告.docx

蚯蚓29肽抗菌活性分析以及基因在大肠杆菌中的表达的中期报告 本实验的中期报告主要包括两部分，分别是蚯蚓29肽的抗菌活性分析以及基因在大肠杆菌中的表达。 1. 蚯蚓29肽的抗菌活性分析 本研究从蚯蚓中分离得到了一种新的抗菌肽，称为蚯蚓29肽。为了分析其抗菌活性，我们进行了以下实验： 1）最小抑菌浓度(MIC)测定：利用微量稀释法测定了蚯蚓29肽对3种细菌（耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和卡他莫拉菌）的最小抑菌浓度（MIC）。结果表明，蚯蚓29肽对这3种细菌均有较强的抑菌作用，MIC值分别为3.125、6.25和12.5 μg/mL。 2）细菌生长曲线测定：利用培养基对蚯蚓29肽处理前后的大肠杆菌进行生长曲线实验。结果表明，在蚯蚓29肽浓度为2×MIC时，细菌生长明显受到抑制，并且呈现出减缓生长或者停滞生长的状态。 2. 基因在大肠杆菌中的表达 我们将蚯蚓29肽的基因克隆到表达载体pET-28a中，并通过电转法将该重组质粒导入大肠杆菌BL21（DE3）中，以表达蚯蚓29肽。为了分析基因在大肠杆菌中的表达情况，我们进行了以下实验： 1）蛋白质电泳：通过SDS电泳检测表达后的菌液中是否出现了目的蛋白。结果显示，由于蚯蚓29肽为小分子肽，电泳条件下检测不到明显的蛋白带。 2）Western blot：利用Western blot检测表达后的大肠杆菌中是否存在目的蛋白，在蛋白提取物中添加蚯蚓29肽单抗后，以及最终贴膜上检测可能出现的信号。结果显示，在表达后的大肠杆菌蛋白提取物中，检测到了与蚯蚓29肽单抗相匹配的带状信号，表明目的蛋白已成功表达。 综上所述，我们的研究表明蚯蚓29肽具有较强的抗菌活性，并且其基因在大肠杆菌中得到了成功表达。未来我们将进一步探究蚯蚓29肽对生物体免疫的影响等问题。