蚯蚓纤溶酶基因Efp-Ⅰ)在大肠杆菌中的克隆、表达及活性分析.pdf

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! ’( )! *’ ) 年 月 !##$ % !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 +,- !##$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 蚯蚓纤溶酶基因（ ）在大肠杆菌中的克隆、表达及活性分析 ! ! ! ， #$%’( )*!+,--’% %. /’0+’%$12’3 )415, 6,, ! ! ! .+%5 !#$%#’ %(#)’ ’ !$*+%,#*+#’ *-.# 78 932’:’21 97$1-’- 赵晓瑜 ，李晓霞，侯 艳，静天玉 ， ， TK;U V1,’OWD XY V1,’OV1, KUZ W,F ,F3 [Y*\ ?1,FOWD 河北大学生命科学学院，保定 #$=##! ， ， ， !(,,%1% (- 3#- % 40#%$0% 5%6%# 7$#8%*#/2 .+(9#$1 #$=##! !#$+ 摘 要 从 查询到的蚯蚓纤溶酶（ ， ）基因序列中，只有 翻译的蛋白质序列与 \/FJ,FC /,96@B’97 G1891F’(-610 /F]-7/ Q^Q ;W_:!_ 天然 在 端具有较高的相似性。根据该基因的 与 序列设计引物，通过 从赤子爱胜蚓（ ）获得一 :- LO ! *O %‘ ‘ .?OLM. :#%$#+- %/#9+ 个完整的基因（ ， ）。序列分析证明，由该基因编码蛋白质的 末端与天然 的 末端的氨基酸顺序完 \/FJ,FC a_=_%_ *O QGLO ! *O 全相同。40,FL9’A16/ 59/31061’F 59’E9,7A 分析显示，该基因与;W_:!_ 相似性极高，二者均属于胰蛋白酶家族；不同的是，该基因 编码蛋白质的序列中含有*O糖苷键的结构域，所以a_=_%_ 是 :- LO !中的一个新基因。在此基础上，构建了该基因的原核 表达载体5+;XO0!VO :- 5O ，并进行了转化、诱导和表达。b/A6/9F 8(’661FE 证明，表达产物同时具有+JL 和 :- LO 的抗原特异 ! ! 性，是 和 的融合蛋白（ ）。经亲和层析分离纯化的 ，在酪蛋白平板和纤维蛋白平板上表现出 +JL :- LO !