肌肉特异性激酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达的中期报告.docx

肌肉特异性激酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达的中期报告 肌肉特异性激酶（Myosin specific kinase，MSK）是一种钙/钙调素依赖性蛋白激酶，能够磷酸化肌动蛋白的重链，参与调节肌肉收缩。目前已经发现多种不同类型的MSK，其中包括Myo1、Myo2、Myo3和Myo4等。本研究选择了Myo3作为研究对象，并进行了该基因的克隆及在大肠杆菌中的表达实验。 首先，我们设计了引物并从人类基因组DNA中扩增出了Myo3基因的全长序列，其长度为2.7 kb。将Myo3基因克隆至表达载体pET-28a中，采用大肠杆菌 BL21(DE3)进行原核表达。经过SDS和Western blotting检测，发现已表达出约120 kDa的His-Myo3融合蛋白。 为了进一步确定His-Myo3是否具有酶活性，我们进行了体外激酶反应实验。将His-Myo3与肌动蛋白重链片段进行共同体外反应，并采用蛋白磷酸化检测试剂盒检测肌动蛋白重链的磷酸化情况。结果显示，His-Myo3能够有效地将肌动蛋白重链磷酸化。 此外，我们也对His-Myo3在大肠杆菌中的表达进行了初步的纯化试验。利用亲和层析柱将His-Myo3选择性地捕获，检测纯化后的蛋白质经过SDS显示肌肉特异性激酶基因已经大量表达。 综上所述，我们成功地克隆了Myo3基因，并在大肠杆菌中进行了原核表达。此外，我们也证实了His-Myo3具有酶活性，并进行了初步的纯化试验。这些结果为进一步研究MSK及其生物学功能提供了基础。