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HER2胞外区基因的克隆及在大肠杆菌中的表达的开题报告

一、研究背景和意义：

HER2是一种细胞膜上的磷酸化酪氨酸酶，是EGFR家族中的一员，参与了多种生物学过程，包括细胞增殖、分化、存活和迁移。HER2的过度表达和/或突变已知与多种肿瘤形成相关。HER2基因在治疗和诊断方面具有重要意义。

在HER2的纳米级探测和免疫治疗上，HER2的胞外区域已被证明是重要的治疗靶点。本研究的目的是通过克隆和表达HER2胞外区基因在大肠杆菌，为后续的HER2药物设计和开发提供基础数据。

二、研究方法：

克隆：以人类HER2基因cDNA作为PCR模板，将其进行片段化，并将其用于克隆到宿主质粒中。使用限制酶切酶对纯化的PCR产物和目的表达载体进行切割，将目标片段克隆入表达载体。转化大肠杆菌以获得表达。

鉴定：通过SDS验证表达蛋白的存在。Westernblotting用来确认目标融合蛋白的特异性表达。GST-亲和纯化用于纯化目标融合蛋白。

结构鉴定：使用圆二色谱进行目标蛋白结构鉴定。超声波剪切辅助外泌体化学发光用于检测HER2胞外区在搭配另一种蛋白质的组成中的定量变化。

三、预期结果：

将HER2胞外区基因成功克隆到大肠杆菌的目标表达载体中，并表达出融合蛋白。利用亲和层析纯化方法纯化融合蛋白，观察其分子质量和表达纯度。Westernblotting将表达蛋白的特异性表达确认。最终，圆二色谱的应用将用于结构鉴定，以确定HER2胞外区在外泌体化学发光中的组成与特性。(这需要考虑时间和经费的限制)