《食品中致病菌快速检测方法 荧光PCR法》(征求意见稿）.docx
T/GDFCAXXXX—2025
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食品中致病菌快速检测方法荧光PCR法
1范围
本文件规定了食品中沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、小肠结肠耶尔森氏菌、空肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌O157:H7、创伤弧菌、霍乱弧菌、铜绿假单胞菌的荧光PCR定性检测方法，包括方法的原理、试剂和耗材、仪器和设备、试样的制备、分析步骤、验证要求等内容。
本文件适用于食品中沙门氏菌（Salmonellaspp.）、志贺氏菌（Shigellaspp.）、副溶血性弧菌（Vibrioparahaemolyticus）、小肠结肠耶尔森氏菌（Yersiniaenterocolitica）、空肠弯曲菌（Campylobacterjejuni）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、单核细胞增生李斯特氏菌（Listeriamonocytogenes)、肠出血性大肠埃希氏菌O157:H7（EscherichiacoliO157:H7）、创伤弧菌（vibriovulnificus）、霍乱弧菌（Vibriocholerae）、铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）的荧光PCR快速定性检测。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB4789.4
食品安全国家标准
食品微生物学检验
沙门氏菌检验
GB4789.5
食品安全国家标准
食品微生物学检验
志贺氏菌检验
GB4789.7
食品安全国家标准
食品微生物学检验
副溶血性弧菌检验
GB4789.8
食品安全国家标准
食品微生物学检验
小肠结肠炎耶尔森氏菌检验
GB4789.9
食品安全国家标准
食品微生物学检验
空肠弯曲菌检验
GB4789.10
食品安全国家标准
食品微生物学检验
金黄色葡萄球菌检验
GB4789.28
食品安全国家标准
食品微生物学检验
培养基和试剂的质量要求
GB4789.30
食品安全国家标准
食品微生物学检验
单核细胞增生李斯特氏菌检验
GB4789.36
食品安全国家标准
食品微生物学检验
大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验
GB4789.44
食品安全国家标准
食品微生物学检验
创伤弧菌检验
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
SN/T1022
进出口食品中霍乱弧菌检验方法
SN/T1870
出口食品中食源性致病菌检测方法实时荧光PCR法
SN/T2099
进出口食品中绿脓杆菌检测方法
SN/T2775
商品化食品检测试剂盒评价方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
荧光PCR法（FluorescencePCRMethod）
T/GDFCAXXXX—2025
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利用荧光标记的探针，通过聚合酶链式反应（PCR）扩增目标基因片段并实时检测荧光信号的检测方法。
3.2
CT值（CycleThreshol）
荧光信号达到设定阈值时的循环数，用于判断目标菌的存在。
4缩略语
下列缩略语适用于本文件。
DNA：脱氧核糖核酸(DeoxyriboNucleicAcid)
PCR:聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction）
dNTP:脱氧核苷三磷酸（Deoxy-ribonucleosidetriphosphate）dATP:脱氧腺苷三磷酸（DeoxyadenosineTriphosphate）
dGTP:脱氧鸟苷三磷酸（Deoxyadenosinetriphosphate）
dCTP:去氧胞苷二磷酸（Deoxycytidinediphosphate）dTTP:脱氧胸苷三磷酸（Deoxythymidinetriphosphate）dUTP:脱氧尿苷三磷酸（Deoxyuridinetriphosphate）
Tris:三（羟甲基）氨基甲烷（Tris(hydroxymethyl)aminomethane）Taq酶:Taq聚合酶（Taqpolymerase）
UNG酶:尿嘧啶-N-糖基化酶（Uracil-N-Glycosylase）
5测定原理
本荧光PCR检测技术是一种基于聚合酶链式反应（PCR）并结合Taqman荧光标记探针的分子生物学方法。选取目标菌属的特异性基因序列设计引物和具有荧光基团标记的寡核苷酸探针。通过生物富集、DNA模板制备、DNA变性、引物退火、DNA延伸、荧光信号检测、CT值分析实现对