基于EST数据库的葡萄APETA_省略_A2基因cDNA克隆及其表达分析_王晨.pdf

果 树学报 ， （ ） 2010 27 2 : 207～212 Journal of Fruit Science 基于EST 数据库的葡萄APETALA2 基因 cDNA 克隆及其表达分析 * 王 晨，刘 洪，房经贵 ，宋长年，曹 雪，杨 光，章 镇 （南京农业大学园艺学院，南京 210095 ） 摘 要： （ ）是拟南芥生长发育特别是花器官发育过程中重要的调控基因。 利用生物信息学方法以拟 APETALA2 AP2 南芥APETALA2 基因 cDNA 序列作为模板，对葡萄 EST 数据库进行同源检索筛选，电子克隆出葡萄AP2 基因（Vv- AP2 ）cDNA 序列。 以香悦葡萄花cDNA 为模板，根据电子克隆的葡萄AP2 基因cDNA 序列设计特异引物，分别利用 技术和特异 技术获得该基因 ’末端和 ’末端，序列拼接后获得葡萄的 基因的 全长。 RACE PCR 3 5 APETALA2 cDNA 该 的全长为 ，命名为 。 核苷酸序列有一个 完整的开放读码框（ ），其 ’ cDNA 2 208 bp Vv-AP2 Vv-AP2 1 536 bp ORF 5 与 ’末端非翻译区分别为 和 。 其中， ’末端含有 的 + （ ）。 该基因在 基因数据库的 3 268 bp 376 bp 3 28 bp Ploy A GenBank 注册号为 FJ809943 。 氨基酸推导结果表明该 cDNA 共编码了 511 个氨基酸， 具备完全保守的核定位信号序列 （ ）以及 个高度保守的重复序列即 结构域。 分别采用半定量 和 实时定量 KKSR 2 AP2 RT-PCR SYBR Green I RT-PCR 初步分析了 Vv-AP2 在葡萄叶、茎、花序、花等不同器官中的表达水平。 其中，Vv-AP2 在花序和花中的表达量明显高 于叶和茎。 关键词： 葡萄； Vv-AP2 ； 基因克隆； 表达分析 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： S663．1 A 1009－9980(2010)02－207－06 Cloning and expression analysis of APETALA2 gene from grapevine （Vitis vinifera ）based on EST database