G250抗原肽与HBcAg融合基因原核表达载体的构建及表达蛋白的免疫分析的中期报告.docx

G250抗原肽与HBcAg融合基因原核表达载体的构建及表达蛋白的免疫分析的中期报告 本实验旨在构建一个能够表达G250抗原肽和HBcAg融合基因的原核表达载体，并进一步通过蛋白免疫印迹分析表达蛋白的免疫原性。 首先，根据G250抗原肽和HBcAg的基因序列，设计合成了相应的引物，通过PCR扩增得到了G250-HBcAg融合基因片段，并将其进行了限制性酶切后用于克隆。 经过测序，确认得到了正确的G250-HBcAg融合基因克隆子，并将其亚克隆至pET-32a(+)表达载体中，得到了pET32a-G250-HBcAg重组质粒。 接着，将pET32a-G250-HBcAg转化至大肠杆菌 BL21(DE3) 中进行原核表达。采用IPTG 诱导表达后，用SDS对表达菌株的蛋白进行分析，发现成功表达出了预期的G250-HBcAg融合蛋白，其中G250-HBcAg融合蛋白的分子量大小与预期一致。 最后，对表达蛋白的免疫原性进行了初步分析。采用蛋白印迹法，用蛋白印迹仪对G250-HBcAg融合蛋白进行检测，发现G250-HBcAg融合蛋白具有免疫原性，可以引起强烈的免疫反应。 综上所述，本实验成功构建了一个能够表达G250抗原肽和HBcAg融合基因的原核表达载体，并成功表达出了目标蛋白并首次进行了免疫反应分析，为进一步研究该融合蛋白的免疫原性提供了基础。