G250抗原肽与HBcAg融合基因原核表达载体的构建及表达蛋白的免疫分析的开.pdf

G250抗原肽与HBcAg融合基因原核表达载体的构

建及表达蛋白的免疫分析的开题报告

1.课题背景

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的疾病，全球范围内有数

十亿人感染HBV，其中约有3500万人患有慢性乙型肝炎，严重威胁人类

健康。目前，已有多种乙型肝炎疫苗上市，但是疫苗的免疫效果和保护

持续时间仍存在不足。

G250抗原（CAIX）是一种膜质型酸性脱氧核糖核酸酶（DNase）,

在肿瘤细胞特异性表达。研究发现G250抗原表达于乙型肝炎相关肝癌

（HCC）组织中，不仅为HCC的良好标志，而且是HCC细胞识别和免疫

细胞识别的一种重要靶点。因此，利用G250抗原肽与HBcAg融合基因

原核表达载体，构建新型疫苗，可以提高乙型肝炎疫苗的免疫效果和保

护时间。

2.研究内容

本课题主要研究内容如下：

（1）设计与合成G250抗原肽与HBcAg融合基因

根据G250抗原肽序列和HBcAg序列，设计并合成融合基因。融合

基因包含G250抗原肽和HBcAg基因，利用原核表达载体进行表达。

（2）构建原核表达载体

利用PCR技术从已有的pET-30a(+)载体中扩增出GST标签和T7启

动子，构建pET-GH表达载体，并进行测序验证。

（3）原核表达载体的转化和表达优化

将pET-GH表达载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中，并通过

不同温度、不同浓度的IPTG诱导表达达到最大表达量，经SDS验

证表达情况。

（4）蛋白的纯化与检测

使用GST纯化技术纯化载体表达的GH蛋白，并通过WesternBlot

和ELISA技术检测GH蛋白的免疫学特性。同时，使用兔抗HBcAg和鼠

抗G250抗原肽作为抗体进行蛋白的免疫反应性检测。

3.预期结果

（1）成功构建G250抗原肽与HBcAg融合基因原核表达载体。

（2）优化表达条件，获得高表达量的GH蛋白。

（3）成功纯化GH蛋白，并通过WesternBlot和ELISA技术检测出

其免疫学特性。

4.研究意义

本研究的意义在于，构建了一种新型的乙型肝炎疫苗，旨在提高疫

苗的免疫效果和保护时间，从而有效控制乙型肝炎的传播和流行。同时，

该研究可以为肝癌的早期诊断和治疗提供新的思路和方法。