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大刺鳅afp2原核表达载体构建.docx

发布：2023-09-02约1.32万字共15页下载文档

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摘要　　[目的]构建大刺鳅抗冻蛋白AFP-2的原核表达载体并对重组蛋白进行纯化及体外抗寒活性进行初步探讨。[方法] 设计原核表达引物，分别在N端、C端引入Nco I和BamH I酶切位点，从实验室保存的菌液pMD18T-AFP-2中扩增不含信号肽的AFP-2片段，双酶切并与相同酶切后的pTWIN1连接，转化到TOP10中，阳性克隆经测序鉴定正确后，提取质粒转化到表达菌株DE3中。诱导表达重组蛋白，纯化后对其抗寒活性进行分析。[结果]成功构建了pTWIN1-AFP-2原核表达载体, 获得纯化AFP-2蛋白，并发现其抗寒活性短时间内效果极佳，但随着时间的推移，抗寒活性降低。关键词：大刺鳅，

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