第 六节 毛细管电泳 徐1.pptx

;;5.1 毛细管电泳的基本原理;电泳（electrophoresis): 在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象，称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同可实现分离。; 1937年，Tiselius(瑞典)将蛋白质混合液放在两段缓冲溶液之间，两端施以电压进行自由溶液电泳，第一次将人血清提取的蛋白质混合液分离出白蛋白和α、β、γ球蛋白。;经典电泳分析;例如：聚丙烯酰胺凝胶电泳; 传统电泳分析：操作烦琐，分离效率低，定量困难，无法与其他分析方法相比。 1981年，Jorgenson和Luckas，用75 ?m内径石英毛细管进行电泳分析，柱效高达40万/m，促进电泳技术发生了根本变革，迅速发展成为可与GC，HPLC相媲美的崭新的分离分析技术——高效毛细管电泳。;5.1.2 高效毛细管电泳基本原理;; 电泳是指带电离子在电场中的定??移动，不同离子具有不同的迁移速率。迁移速率与哪些因素有关？ 当带电离子以速度 v 在电场中移动时，受到大小相等、方向相反的电场推动力和平动摩擦阻力的作用。;所以，迁移速度：;二、电渗现象与电渗流 electroosmosis and electroosmotic flow;2.HPCE中的电渗现象与电渗流;3.HPCE中电渗流的大小与方向;HPCE中电渗流的方向;4. HPCE中电渗流的流形; 带电粒子的迁移速率=电泳+电渗流，两种速度的矢量和。 正离子：两种效应的方向一致，在负极流出。;三、HPCE中影响电渗流的因素 factors influenced electroosmosis;3. 电解质溶液性质的影响;4. 温度的影响;5. 添加剂的影响;四、淌度 mobility ;五、HPCE中的参数与关系式  parameters and relation in HPCE;3.分离度 ;六、影响分离效率的因素—区带展宽 factors influenced the efficiency—band broadening ;3.焦耳热与温度梯度的影响 ;4.溶质与管壁间的相互作用 ;5.其他影响因素 ; 5.2高效毛细管电泳仪high performance capillary electrophoresis apparatus;一、仪器流程与主要部件 process and main assembly;1.高压电源; 毛细管结构 ;3.缓冲液池;二、毛细管电泳的进样方式 injection method of HPCE; 毛细管一端插入样品瓶，加电压；;5.3毛细管电泳分离类型;一、毛细管区带电泳capillary zone electrophoresis ，CZE;二、毛细管凝胶电泳 capillary gel electrophoresis ，CGE; 1.缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。; 2. 电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流 ν电泳 ，负电胶束以较慢的速度向负极移动；;5.3 分离类型;一、毛细管区带电泳capillary zone electrophoresis ，CZE;二、毛细管凝胶电泳 capillary gel electrophoresis ，CGE; 1.缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。; 2. 电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流 ν电泳 ，负电胶束以较慢的速度向负极移动；; 1. 根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术； 2. 毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当施加直流电压（6～8V）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度； 3. 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时，呈电中性，淌度为零；; 4. 聚焦：具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移，分别到达满足其等电点pH的位置时，呈电中性，停止移动，形成窄溶质带而相互分离；; 1. 将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子，试样离子的淌度全部位于两者之间，并以同一速度移动。 2. 负离子分析时，前导电解质的淌度大于试样中所有负离子的。所有试样都按前导离子的速度等速向阳极前进，逐渐形成各自独立的区带而分离。阴极进样，阳极检测。; 3. 不同离子的淌度不同，所形成区带的电场强度不同(ν=μE)，淌度大的离子区带电场强