毛细管电泳法.ppt

3.分离度第23页，共54页，星期日，2025年，2月5日四、影响分离效率的因素—区带展宽1.纵向扩散的影响在CE中，纵向扩散引起的峰展宽：σ2=2Dt由扩散系数和迁移时间决定。大分子的扩散系数小，可获得更高的分离效率。2.进样的影响当进样塞长度太大时，引起的峰展宽大于纵向扩散。分离效率明显下降；理想情况下，进样塞长度：Winj=(24Dt)1/2实际操作时进样塞长度小于或等于毛细管总长度的1%～2%。第24页，共54页，星期日，2025年，2月5日3.焦耳热与温度梯度的影响电泳过程产生的焦耳热可由下式计算：?m：电解质溶液的摩尔电导；I：工作电流：cm：电解质浓度；散热过程中，在毛细管内形成温度梯度（中心温度高），破坏了塞流，导致区带展宽。改善方法：（1）减小毛细管内径；（2）控制散热；第25页，共54页，星期日，2025年，2月5日4.溶质与管壁间的相互作用蛋白质、多肽带电荷数多，吸附问题特别严重，是目前分离分析该类物质的一大难题。细内径毛细管柱，一方面有利于散热，另一方面比表面积大，又增加了溶质吸附的机会。减小吸附的方法和途径：加入两性离子代替强电解质，两性离子一端带正电，另一端带负电，带正电一端与管壁负电中心作用，浓度约为溶质的100-1000倍时，抑制对蛋白质吸附，又不增加溶液电导，对电渗流影响不大。第26页，共54页，星期日，2025年，2月5日第三节毛细管电泳仪第27页，共54页，星期日，2025年，2月5日一、仪器主要部件第28页，共54页，星期日，2025年，2月5日1.高压电源（1）0～30kV稳定、连续可调的直流电源；（2）具有恒压、恒流、恒功率输出；（3）电场强度程序控制系统；（4）电压稳定性：0.1%；（5）电源极性易转换；第29页，共54页，星期日，2025年，2月5日2.毛细管毛细管是CE分离的心脏。理想的毛细管必须是电绝缘、紫外/可见光透明且富有弹性的，目前可以使用的有玻璃、熔融石英或聚四氟乙烯塑料等。毛细管内径一般为20～100μm。第30页，共54页，星期日，2025年，2月5日第31页，共54页，星期日，2025年，2月5日3.缓冲液池化学惰性，机械稳定性好；4.检测器要求：具有极高灵敏度，可柱端检测；检测器、数据采集与计算机数据处理一体化；类型检测限/mol特点紫外-可见10-13～10-15加二极管阵列，光谱信息荧光10-15～10-17灵敏度高，样品需衍生激光诱导荧光10-18～10-20灵敏度极高，样品需衍生电导10-18～10-19离子灵敏，需专用的装置；第32页，共54页，星期日，2025年，2月5日二、毛细管电泳的进样方式进样量：毛细管长度的1%-2%；纳升级、非常小；1.流体力学进样方式（1）进样端加压（2）出口端抽真空（3）虹吸进样第33页，共54页，星期日，2025年，2月5日毛细管一端插入样品瓶，加电压；2.电动进样方式进样不均：电歧视现象，淌度大的离子比淌度大的进样量大；离子丢失：淌度大且与电渗流方向相反的离子可能进不去；特别适合黏度大的试样。3.扩散进样试样通过扩散作用进入分离柱端口处。第34页，共54页，星期日，2025年，2月5日第四节毛细管电泳类型常用的六种电泳分离模式；根据试样性质不同，采用不同的分离类型；每种机理的选择性不同；第35页，共54页，星期日，2025年，2月5日一、毛细管区带电泳

（Capillaryzoneelectrophoresis,CZE）带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流速度的矢量和。正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出；中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出；阴离子：两种效应的运动方向相反；ν电渗流ν电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,同种类离子由于差速迁移被相互分离。CZE是最基本、应用广的分离模式；第36页，共54页，星期日，2025年，2月5日二、毛细管凝胶电泳

Capillarygelelectrophoresis，CGE将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶。其具有多孔性，类