毛细管电泳答题.ppt

第17章 毛细管电泳 electrophoresis 20世纪30－40年代 蒂塞利乌斯 (A.W.K.Tiselius）建立了移动界面电泳，将电泳发展成分离技术 获得1948年诺贝尔化学奖 毛细管电泳毛细管电泳的原理 1 装置 毛细管 数据处理 电极 检测器 电极 试样 缓冲液 缓冲液 高压电源 （可高至30KV） 电泳 电渗 电渗 电渗流的控制 毛细管电泳 2 电泳和电渗 电渗流的流型特点 电渗流 HPLC 塞流 层流 分离原理 分离原理 柱效和分离度 柱效和分离度 毛细管电泳和电色谱仪器装置 进样系统 电源及其回路 毛细管及其温度控制 1.高压电源 毛细管结构 检测系统 检测系统 毛细管电泳分离类型及应用 毛细管区带电泳（CZE） 毛细管区带电泳（CZE） 胶束电动毛细管色谱（MEKC） 毛细管凝胶电泳（CGE） 毛细管等电聚焦（CIFF） 毛细管等速电泳（CITP） 毛细管电色谱柱技术 填充柱 填充柱 填充柱 填充柱 填充柱 填充柱 开管柱 整体柱（连续床） CEC应用 1. 将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子，试样离子的淌度全部位于两者之间，并以同一速度移动。 2. 负离子分析时，前导电解质的淌度大于试样中所有负离子的。所有试样都按前导离子的速度等速向阳极前进，逐渐形成各自独立的区带而分离。阴极进样，阳极检测。 3. 不同离子的淌度不同，所形成区带的电场强度不同(ν=μE)，淌度大的离子区带电场强度小； 沿出口到进口，将不同区带依次排序1、2、3、4? ? ? ?电场强度依次增大。假设“2”号中离子扩散到“3”号，该区电场强度大，离子被加速，返回到“2”区；当“2”号中离子跑到“1”号区，离子被减速使之归队； 4. 特点：界面明显，富集、浓缩作用； 毛细管电色谱（CEC）是毛细管电泳与高效液相色谱的有机结合，其基本理论、仪器装置与毛细管电泳大致类似。 最大的不同是毛细管柱引入了色谱固定相，使CEC同时具有CE与HPLC的分离机理，对中性物质和荷电物质都能达到理想的分离效果。 因此毛细管柱是CEC的心脏，制柱技术是CEC的关键。按照固定相不同形式，CEC可分为填充柱、开管柱和整体柱（连续床）。 填充柱在CEC中应用最广泛，其最大优点是可以利用众多的HPLC固定相，根据化合物与固定相作用不同实现高效分离。 1 入口柱塞; 2 填充部分; 3 出口柱塞; 4 检测窗口; 5 开管部分 柱塞制作 柱塞的制作对于填充柱非常关键。合格的柱塞必须满足如下要求： 有足够的机械强度,能够承受填充时的高压； 化学惰性，耐有机溶剂和宽pH值的缓冲液； 有合适的孔隙率，既不使流动相受阻，又可防止固定相颗粒通过； 死体积小，避免电色谱峰展宽。 柱塞制作方法很多，目前应用较多的有水玻璃烧制法和填料直接烧制法。 填充柱制备 高压匀浆填充法 电动填充法 CEC填充固定相 在成功掌握填充柱制备技术条件下，CEC固定相是影响毛细管填充柱分离选择性、柱效、分离速度的重要因素，也是发展新型CEC分离模式的基础。 应用于HPLC的各种固定相已被应用于CEC的分离分析中，其中以十八烷基键合硅胶固定相(ODS)研究最多，由于CEC是以电驱动流动相，不存在柱压降问题，因而可以采用粒径很小的固定相，以提高柱效。 混合官能团固定相是专门针对CEC研制的新型填料，这一