人骨唾液蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达.pdf

ISSN1007．7626 中国生物化学与分子生物学报 2004年6月 CN1 1-3870／Q Molecular 20(3)：325～329 ChineseJoumalof and Biolo霉Ⅳ Biochemistry 人骨唾液蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达 王 董 燕+。， 张宏斌， 武 婕， 郑文岭 (广,111军区广州总医院医学实验中心，广州510010) 摘要 利用RT—PCR技术，从人骨膜组织总RNA中扩增长度为1kb的人骨唾液蛋白(bone II，进行双链核苷酸序列测定．构建人BSP毕 sialoprotein，BSP)基因编码区序列，克隆至pBluescript 赤酵母表达质粒pPICZaA—hBSP并导入毕赤酵母Pichiapastoris 测rhBSP的分泌表达．采用镍离子亲合层析纯化rhBSP并检测生物学活性．结果表明，克隆片段与 基因库所登录的序列相一致，分泌表达的rhBSP．His融合蛋白分子量约为67kD，占培养上清总蛋白 的80％，浓度约为0．248 g／L，rhBSP蛋白具有抑制羟基磷灰石晶体生长的活性． 关键词 骨，唾液糖蛋白，分泌表达，毕赤酵母 中图分类号Q812 and ofHumanBone CloningExpression inPichia GSl15 Sialoproteinpastoris WANG Jie。，DONGYan一，ZHANG Jie，ZHENG Hong．bin，WU Wen．1ing (CenterofMedicalResearch，General 510010，China) HospitalofGuangzhouMilitaryCommand，Guangzhou kb Abstract0Be DNA forhumanbone was with fragmentencoding sialoprotein(BSP)cDNAamplified human totalRNAas andclonedto II．ne nucleotide was periosteum template pBlueseript sequenceanalysis vector wasconstructed．1inearizedandintrodueedtoPichia performed．r111eexpressionpPICZaA—h粥Pgene GSl15 of was rhBSPdetectedSDS．PAGEandWestem pastoris byelectroporation．Theexpression by blotting． was TherhBSP Ni“一