金针菇免疫调节蛋白基因fip-fve 在毕赤酵母GS115 中诱导型和组成型表达.pdf

464 生 物 工 程 学 报 林景卫 等/金针菇免疫调节蛋白基因fip-fve 在毕赤酵母GS115 中诱导型和组成型表达 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn March 25, 2014, 30(3): 464−471 DOI: 10.13345/j.cjb.130258 ©2014 Chin J Biotech, All rights reserved 农业生物技术 金针菇免疫调节蛋白基因fip-fve 在毕赤酵母GS115 中 诱导型和组成型表达 1,2 2 2 2 2 2 1 3 1 林景卫 ，贾佳 ，钟鸣 ，陈丽静 ，李浩戈 ，郭志富 ，齐明芳 ，刘立侠 ，李天来 1 沈阳农业大学园艺学院，辽宁 沈阳 110866 2 沈阳农业大学生物科学技术学院，辽宁 沈阳 110866 3 东北师范大学生命科学学院，吉林 长春 130024 林景卫, 贾佳, 钟鸣, 等. 金针菇免疫调节蛋白基因fip-fve 在毕赤酵母 GS115 中诱导型和组成型表达. 生物工程学报, 2014, 30(3): 464−471. Lin JW, Jia J, Zhong M, et al. Inducible and constitutive expression of fip-fve from Flammulina velutipes in Pichia pastoris GS115. Chin J Biotech, 2014, 30(3): 464−471. 摘 要: 为获得稳定来源并且具有生物学活性的重组金针菇免疫调节蛋白 (Fip-fve) ，将fip-fve 基因转至毕赤 酵母GS115 中进行诱导型和组成型表达。用PCR 方法从金针菇子实体基因组DNA 中扩增fip-fve 基因，连接 至 pPIC9 构建诱导型表达载体 pPIC9-FIP-fve ，从毕赤酵母基因组 DNA 中扩增三磷酸甘油醛脱氢酶启动子 (pgap ) ，替换pPIC9-FIP-fve 上乙醇氧化酶启动子 (paox1 ) 构建组成型表达载体pPIC9-PGAP-FIP-fve 。将线性 化的两种表达载体用PEG 法转化毕赤酵母GS115 ，经组氨酸缺失培养基筛选和酵母菌落PCR 鉴定后进行表达。 结果表明，重组Fip-fve 在以甲醇 (1% ，V/ V) 为碳源进行诱导型表达4 d 达到最高，粗蛋白表达量为158.2 mg/L， 在以葡萄糖 (10%) 和甘油 (1% ，V/ V) 为碳源进行组成型分别在表达第 4 天和第 5 天达到最高，粗蛋白分别 为46.3 mg/L 和29.5 mg/L 。SDS及Western blotting 证明重组Fip-fve 已正确表达，血细胞凝集活性检测 初步证明重组Fip-fve 具有良好生物学活性。 : 金针菇,免疫调节蛋白,毕赤酵母,组成型表达 Received: May 19, 2013; Accepted: August 20, 2013 Supported by: National Natural Science Foudation of China (No.. Corresponding author: Tianlai Li. Tel: +86-24 E-mail: tianlaili@126.com 国家自然科学基金 (No. 31