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IL1Ra-HSA基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达的

开题报告

一、选题背景

白细胞介素-1受体拮抗剂（IL-1Ra）是一种天然的抗炎蛋白，它通

过抑制细胞因子IL-1α和IL-1β与它们的受体结合来防止炎症和自身免疫

性疾病的发生。IL-1Ra是由一条500多个氨基酸的蛋白质组成，其中人

类IL-1Ra（hIL-1Ra）是最广泛研究的一种，现已经被证明对许多不同的

疾病具有治疗作用。因此，对于IL-1Ra的研究具有重要的意义。

在大多数情况下，生产hIL-1Ra采用的是无脊椎动物或哺乳动物细

胞的工程生产，然而，这种生产方法的成本很高。因此，应用蛋白表达

系统来表达和生产是一种替代方法。毕赤酵母是一种被广泛研究的真菌，

它具有许多重要的生物学特性，如生长速度快、简便易行的操作、易被

合成表达蛋白等。因此，用毕赤酵母来表达hIL-1Ra用于替代昂贵的细

胞生产是一种新的研究方法。

二、研究内容

本研究旨在在毕赤酵母中表达hIL-1Ra并研究其在该酵母菌中的表

达情况。具体内容包括：

1.基因的克隆：通过PCR方法从hIL-1RacDNA中扩增该基因，并

克隆到一个表达载体pPIC9K中。

2.转化和优化表达：将重组质粒转化到毕赤酵母的狄氏表达系统中

并优化其表达条件，如培养温度、培养时间、培养pH值等。通过蛋白印

迹、Westernblot和ELISA等方法检测表达情况。

3.纯化和活性鉴定：通过色谱等方法从酵母发酵液中纯化hIL-1Ra，

并进行全面的活性鉴定。

三、研究意义

本研究将为生产高效和经济的hIL-1Ra提供新的方法。该方法可以

大幅降低成本，并提高生产效率。此外，该研究的成功实现也证明了毕

赤酵母作为一种高效表达外源蛋白的系统在生产越来越多的生物药物方

面具有巨大的应用潜力。