人白介素-11在毕赤酵母中的克隆与表达的开题报告.docx

人血清白蛋白/人白介素-11在毕赤酵母中的克隆与表达的开题报告

摘要：

本研究旨在克隆和表达人血清白蛋白（HSA）和人白介素-11（IL-11）基因，获得可大量生产的重组蛋白，为其进一步的研究和应用打下基础。采用PCR技术，克隆HSA和IL-11基因，并将其插入pPICZαA载体中。然后将重组质粒转化到毕赤酵母中，通过不同培养条件进行表达优化。最终通过SDS和WesternBlot验证获得了目标蛋白的表达。

关键词：人血清白蛋白；人白介素-11；毕赤酵母；表达；克隆

引言：

人血清白蛋白（HSA）是一种非常重要的蛋白质，占到人体血浆总蛋白的60%~65%。它在维持血容量、调节血液的胶体渗透压和维持酸碱平衡方面具有重要作用。而人白介素-11（IL-11）是一种细胞因子，对造血系统及其他身体系统的发育和功能都有很大的影响。因此，对HSA和IL-11的生产和研究具有重要意义。

毕赤酵母系统是一种广泛应用于蛋白质表达和分泌的表达系统，具有优异的表达能力和稳定性。因此，本研究选择毕赤酵母系统来表达HSA和IL-11基因。

材料与方法：

实验所需材料：受精卵、T4DNA连接酶、毕赤酵母GS115、pPICZαA载体、PCR合成的HSA和IL-11基因、DNA纯化试剂盒、蛋白质SDS凝胶、WesternBlot试剂盒等。

实验步骤：

1.PCR扩增HSA和IL-11基因。

2.将PCR产物与pPICZαA载体进行连接。

3.将重组质粒转化到毕赤酵母中。

4.对转化后的毕赤酵母进行培养和筛选。

5.鉴定表达的HSA和IL-11蛋白。

结果：

1.经PCR扩增后，获得了HSA和IL-11基因。

2.将HSA和IL-11基因克隆到pPICZαA载体上。

3.成功将重组质粒转化到毕赤酵母中。

4.通过不同的培养条件进行表达优化，获得了合适的表达条件。

5.经过SDS和WesternBlot的验证，证实了HSA和IL-11的表达。

结论：

本研究成功克隆和表达了HSA和IL-11基因，通过毕赤酵母表达系统成功生产了目标蛋白。这为进一步研究和应用这两种重要蛋白打下了基础。