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人血清白蛋白人白介素-11在毕赤酵母中的克隆与表达的开题报告

开题报告

一、研究背景

人血清白蛋白（humanserumalbumin，HSA）是一种重要的血浆蛋白，占血浆总蛋白的60%~70%。其主要功能包括调节血容量、维持血浆渗透压和运输物质等。同时，人白介素-11（humaninterleukin-11，hIL-11）也是一种重要的细胞因子，可调节多种生理过程，如血小板生成、免疫反应、造血等。

目前，HSA和hIL-11被广泛应用于临床诊断和治疗领域。因此，开发高效、经济、可重复性的生产方法对于大规模制备这些蛋白质至关重要。

毕赤酵母（Pichiapastoris）是一种常用的真菌表达系统，具有高效表达、易于培养和纯化等优点，因此被广泛应用于重组蛋白的生产中。本研究旨在利用毕赤酵母系统表达HSA和hIL-11，并对其表达和纯化条件进行优化，为其大规模制备提供技术支持。

二、研究内容

1.克隆HSA和hIL-11基因

采用RT-PCR方法从人体组织中提取HSA和hIL-11基因，然后将其插入到毕赤酵母的表达载体pPICZαA中。

2.优化表达条件

对HSA和hIL-11的表达和纯化条件进行优化。包括：构建原核启动子和信号肽片段的多种组合、不同培养温度和pH值下的表达水平及培养时间等条件的优化。

3.表达检测

通过SDS和Westernblot等方法检测HSA和hIL-11的表达情况。并对表达量进行分析和比较。

4.纯化和鉴定

对表达的HSA和hIL-11进行纯化和鉴定，主要采用离子交换和亲和层析技术，并通过质谱等方法进行鉴定。

五、研究意义

本研究将建立毕赤酵母表达HSA和hIL-11的技术路线，为大规模制备这些蛋白质提供技术支持。同时，对毕赤酵母表达系统的优化研究也具有重要的意义，能为其他蛋白质的表达提供参考和借鉴。