小鼠外周血单个核细胞分离_纯化_徐太哲.pdf

·10 · 2016 8 39 4 黑龙江医药科学 年 月第 卷第 期 ① 、 小鼠外周血单个核细胞分离 纯化 1 2 2 ， ， 徐太哲 李 丽 王长山 (1． ， 154003 ;2 ． ， 154007) 佳木斯市红十字医院 黑龙江佳木斯 佳木斯大学 黑龙江佳木斯 : : (PBMC) ， ， 。 摘要 目的 探讨小鼠外周血单个核细胞 最佳分离条件 提高细胞获得率与纯度 以便后续分子生物学实验 方 : ， 、 、 ， EDTA － K2 、 、 ，Ficoll 法 小鼠摘除眼球取血 设置离心力 离心时间 实验环境温度等梯度优化 分别采用 肝素 枸橼酸钠抗凝 ， 、 ， 。 :Ficoll 密度梯度离心法分离单个核细胞 直接进行贴壁培养和分析获得率 纯度 计数存活率 结果 密度梯度离心法经条件优 PBMC 85% ， 80% ， 92% 。 :Ficoll 化后分离的 纯度可达 细胞获得率最高可达 以上 活细胞百分率在 以上 结论 密度梯度离心法在 PBMC， 。 优化条件下可有效地分离 对后续分子生物学实验无影响 : ;Ficoll ;PBMC 关键词 小鼠 密度梯度离心 中图分类号:Ｒ446． 11 + 3 文献标识码:A 文章编号:1008 － 0104 (2016)04 － 0010 － 02 外周血单个核细胞(Peripheral blood mononucle- 遍备用［4 ～ 7］。 ar cells ，PBMCs) 。 ， 包括淋巴细胞和单核细胞 是免疫 因细胞获得率与纯度关系到实验效果 一般根 系统的重要组成， 据血液样本量确定离心条件， ， 是研究免疫老化和衰老的主要依 血液样本量越多 离心 。 T 、B ， ， 据 研究 淋巴细胞首要分离外周血单个核细 力越大 其离心时间越长 最终目的是达到最佳分离 ， Ficoll － hypaque ， 、 胞 主要的分离方法是 密度梯度离 效果 对于小鼠本实验依据离心力 离心时间等