《分子生物学研究技术》第1章第8节噬菌体载体.pptx

第一章;2;Familiarcoliphage;噬菌体结构;5;噬菌体的生物学性状;一、λ噬菌体;（一）λ噬菌体;DNA进入宿主后，其两端12bp的互补单链粘末端环化成环状双链，宿主体内的DNA连接酶很快将切口封闭而形成闭环DNA分子。该DNA分子在感染早期充当转录模板，可以两种不同的方式繁殖：

裂解生长

溶原生长;溶原生长与裂解生长;BiologyofBacteriophageLamda;12;13;14;2、江噬菌体基因组的结构;16;cI，cro、N、cⅡ、cⅢ和Q，头尾和裂解基因在基因组中的位置;（1）江噬菌体的调节基因：;19;（2）溶原生长和裂解生长的决定;21;22;23;左右PL和PR启动子同时起始转录;N基因：促进左右启动子越过终止子继续转录;抗终止子作用机理;生长途径的决定机理;cI反馈调节机理;29;噬菌体的侵染和DNA的复制

?环和滚环复制;裂解生长中DNA的复制;裂解生长中噬菌体的包装;入噬菌体的装配;（2）溶原生长DNA的复制;Figure.Modelfortheintegrationofphage入intotheE.colichromosome.Reciprocalrecombinationtakesplacebetweenaspecificattachmentsiteonthecircular入DNAandaspecificregiononthebacterialchromosomebetweenthegalandbiogenes.;36;基因组特征;38;39;Figure4.21.Cloningvectorsbasedonbacteriophagel.(A)Inthelgenome,thegenesarearrangedintofunctionalgroups.Forexample,theregionmarkedasproteincoatcomprises21genescodingforproteinsthatareeithercomponentsofthephagecapsidorarerequiredforcapsidassembly,andcelllysiscomprisesfourgenesinvolvedinlysisofthebacteriumattheendofthelyticphaseoftheinfectioncycle.Theregionsofthegenomethatcanbedeletedwithoutimpairingtheabilityofthephagetofollowthelyticcycleareindicatedingreen.(B)Thedifferencesbetweenalinsertionvectorandalreplacementvector.;41;42;外源DNA长度：

5-20kb;44;45;46;Lambdagt10 map;48;Insertionalcloning;50;Lambdagt11 map;52;53;EMBL3和EMBL4;55;ReplacementoflambdaDNA;57;58;59;提供（cDNA文库表达）载体的公司;LambdaZAP?IIVector;62;63;Charon4A;65;（四）、文库的构建;2、基因文库的构建;Cloninginphage?.A;Invitrolambdaphagepackaging;噬菌斑评价;71;72;73;GeneralprocedureforcloningDNAfragmentsincosmid

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