《分子生物学研究技术》绪论.pptx

分子生物学研究技术;绪论;二、分子生物学的主要研究内容;1.核酸的分子生物学;2.蛋白质的分子生物学;3.细胞信号转导的分子生物学;三、分子生物学研究简史;（一）重组DNA技术发展史上的重大事件;（一）重组DNA技术发展史上的重大事件;（二）分子生物学的研究历史;Griffith（1928）;;;1950年后：Chargaff和Markham等用纸层析和分光光度计方法分析了DNA的碱基组成，发现了碱基组成规律：A=T，G=C。为Watson-Crick建立DNA双螺旋结构模型提供了重要依据。

1952年：AHersheyMChase用32P标记噬菌体的DNA，35S标记蛋白，然后感染大肠杆菌，结果发现只有DNA分子进入细胞内，蛋白仍留在细胞外。证明DNA是噬菌体的遗传物质。

;AHersheyMChase;AHersheyMChase实验;1953年：Watson-Crick提出DNA双螺旋结构模型。是20世纪自然科学最大的突破之一，揭开了分子生物学的序幕，为分子遗传学的研究奠定了基础。;JDWatson;1956年：AKornberg发现了DNA聚合酶，

可以在体外复制DNA。

1958年：Crick提出了“中心法则”。

遗传信息可以从：

DNA RNA 蛋白质

;1961年：FJacobJMonod假设mRNA的功能,NMNirenberg等破译了第一个遗传密码。

;1965年：RWHolley等首先测定了酵母丙氨酸tRNA的核苷酸序列。

1966年：NMNirenberg等破译了全部遗传密码。

1970年：HMTemin等发现了逆转录酶。

70年代：诞生了DNA重组技术，是分子生物学的第二次革命，导致新的生物技术产业的兴起。

1975年：Sanger建立了DNA酶法测定DNA序列技术。

1976年：AMMaxamWGilbert建立了DNA的化学测定技术。;1981年：TCech发现RNA有催化功能——核酶。

R.D.Palmiter和R.L.Brinster获得转基因小鼠。

A.C.Spradling和GM.Rubin获得转基因苍蝇。

1982年：美、英批准使用第一例基因工程胰岛素。

Sanger等完成噬菌体48502bp全序列测定。

1983年：RSimonsTMizuno发现反义RNA。

获得第一例转基因植物（烟草）。

1986年：RBenne发现mRNA可拼接。

GMO首次环境释放。

1986年：HDulbecco首先提出“人类基因组计划 －HGP”

;1990年10月：美国政府决定出资30亿美元，用15年时间完成人类基因组DNA序列测定。

J.D.Watson出任首席科学家。

参加的国家：美国、英国、法国、德国、日本和中国。全部序列提前完成。

模式生物基因组计划：酵母，线虫，果蝇，猪,鸡，家蚕； 拟南芥，水稻，玉米,高粱等。

目前，已经进入了后基因组时代，在整体水平上研究基因组的功能，并产生了功能基因组学,转录组学，蛋白质组学,代谢组学。

1994年：第一批基因工程西红柿在美国上市。

（92年，中国转基因烟草（TMV,CMV)商品化生产，8600hm)

1997年：英国爱丁堡罗斯林研究所克隆羊诞生。

;四、内容安排及要求;课程内容

第一章???????分子克隆的工具酶和载体

常用工具酶介绍；载体及其发展。

第二章???????目的基因的获得

主要介绍各种基因克隆的方法技术

第三章???????基因表达调控的研究

基因的结构分析；启动子分离；启动子活性分析；顺式作用元件确定；基因重组及转化技术；内外源基因的相互作用；基因沉默的预防和利用；RNAi技术。

第四章???????分子杂交技术

Southern杂交；Northern杂交；Western杂交；原位杂交（in-situhybridization）；FISH(Fluorescentinsituhybridization)。

第五章???????分子文库技术

cDNA和基因组文库的构建、扩增和目的基因的筛选；

噬菌体表面展示技术。;第六章??外源基因表达技术

原核表达系统、真核表达系统和生物反应器

第七章??DNA和蛋白质的相互作用研究

凝胶滞后实验；干扰实验（甲基化，尿嘧啶）；DNAaseI足迹分析；Southwestern杂交

第八章蛋白质和蛋白质的相互作用研究

蛋白质配体结合结构域筛选；细菌双杂合系统；酵母双杂交系统;酵母单杂交及三杂交；免疫共沉淀技术

第九章DNA突变技术，基因组定向编辑技术（ZFN/TALEN/CRISPR-Cas9