超高效液相色谱法检测大豆异黄酮含量 .pdf

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大豆异黄酮(CatheRineGenistein)是黄酮类化合物的一种，它作为一种次生谢产物，形成于大豆植物体生长

过程。大豆异黄酮结构与雌激素相似，因此又称植物雌激素［1］。大豆异黄酮不仅具有明显的抗氧化作用，而且还可以起

到预防骨质疏松、多种癌症、心血管疾病等功效［2］。大豆异黄酮母核为3-苯并毗喃酮，以游离型的首元和结合型的糖昔

形式存在［3］。糖昔占大豆异黄酮总量的97%〜98%,昔元仅占大豆异黄酮总量的2%〜3%。糖昔主要有大豆昔(daidzin)、

料木昔(genistin),昔元主要有染料木素(genistein)、大豆昔元(daidzein)［4］。目前，紫外吸收法、气相色谱法、

高效液相色谱法等［5-7］是大豆异黄酮的主要检测方法。其中，紫外吸收法灵敏度不高，只能测定大豆异黄酮总量。气相

色谱法前处理复杂，需要对异黄酮进行衍生。高效液相色谱法具有样品分离度好、定量准确、操作容易、处理简单等优

点［6］。因此，本文建立一种超高效液相色谱法，用于测定大豆中大豆异黄酮含量，以提供一种快速简便、灵敏度高的大

豆异黄酮含量检测方法。

1材料与方法

1.1材料与试剂

大豆(市购)，粉碎备用。

大豆昔(daidzin)、大豆昔元(daidzein)、染料木素(genistein)、染料木昔(genistin)(纯度＞98%),成

都曼思特生物科技有限公司；甲醇、乙月青，erck公司，为色谱纯；乙酸，erck公司，为分析纯；超纯水，一级水。

1.2仪器与设备

ACQUITYUltraPerformanceLC超高效液相色谱仪，Waters公司；2998PhotodiodeArrayDetector光电二极

管阵列检测器，Waters公司；涡旋混合器，IKA公司；超声波仪，宁波东和超声波科技有限公司；恒温干燥箱，上海

宏泰仪器设备厂；高速离心机，HITACHI公司；分析天平，OHAUS公司；PURELABChorus超纯水机，ELGA公司。

1.3试验方法

1.3.1标准工作液配制

标准储备液：用分析天平准确称取大豆昔、大豆首元、染料木素、染料木＜0.01g,置于100mL容量瓶中，加

入70%甲醇溶解，并定容至刻度，制成0.1mg-mL-1标准储备液。

标准工作液：临用时，根据实际需要，对标准储备液用进行适当的浓度稀释，得到标准工作液，保存于冰箱中备

用。

1.3.2样品处理

用分析天平准确称取试样10g,精确到0.01g,将试样置于100mL离心管中。加入70%甲醇定容，涡旋混合

60s,超声波仪中振荡20min,然后放入离心机内，在离心机中以9000r-min-1离心5min,取离心上清液，移至100

mL容量瓶中。用0.45pm滤膜过滤，加入70%甲醇补至相应刻度。吸取10mL样品，将其置于100mL离心管中，

恒温干燥箱浓缩至干，用乙If-0.2%乙酸溶液将浓缩样品定容至5mL,再用0.45pm滤膜过滤，移至进样瓶中。

1.3.3色谱条件

色谱柱为WatersACQUITYUPLCBEHCC18柱[8](150mmx2.1mm,1.7pm),进样量为5pL；流速为0.15

mL-min-1；经全波长扫描大豆异黄酮成分，并比较了不同波长的峰，结果发现，在260nm波长处灵敏度高，因此检测

波长选择260nm；大豆异黄酮的保留值和分离度都受柱温的影响，为了避免柱温较高，缩短保留时间，选择30°C柱温；

由于大豆异黄酮极性较弱，为实现完全分离，通过研究乙腊和不同浓度的乙酸对大豆异黄酮成分保留值和分离度的影响，

流动相选用乙If-0.2%乙酸，梯度洗脱条件如表1所示。

表1分离梯度程序表

2结果与分析

2.1线性关系及检出限

吸取一定量的大豆异黄酮标准工作液，用甲醇水溶液将其稀释成1.0pgmL-13.0pgmL-15.0pgmL-17.0

pgmL-19.0pgmL-1以及0jjg・mL-1的溶液，经处理后进行测定，每个大豆异黄酮成分重复测定3次。设定浓度为

横坐标X,大豆异黄酮成分3次测定峰面积平均值为纵坐标Y,对其进行线性回归，得到大豆异黄酮成分的标准曲线,

如表2所示。线性检测范围均为1.0〜9.0。

表2大豆异黄酮成分标准曲线表

2.2精密度试验