生物化学4蛋白质3-蛋白结构和功能,蛋白质重要性质及分离纯化.ppt

* 五、 蛋白质的沉淀 蛋白质亲水胶体稳定的因素： 水化膜：水合 电荷：同种电荷互相排斥 蛋白 蛋白 + + + + 蛋白 + + + + + + + + 蛋白 + + + + 水化膜 表面电荷 沉淀 蛋白质沉淀的原理： 破坏水化膜 中和电性 蛋白质沉淀的方法 盐析法 salt precipitation 常用的盐： 硫酸铵、硫酸钠、亚硫酸钠、氯化钠 原理： 蛋白质不变性、可以复溶 有机溶剂沉淀 脱水剂：甲醇、乙醇、丙酮 原理：破坏水化膜 冰冷条件下蛋白质不变性 某些酸类沉淀： 重金属盐沉淀： pHpI、蛋白质变性 pHpI、 蛋白质变性 加热凝固： 蛋白质变性 ◆蛋白质变性与沉淀反应是两个不同的概念 ◆ 蛋白质的变性与复性 ◆蛋白质的变性与复性 ◆蛋白质变性的概念 ◆蛋白质变性的因素 ◆变性蛋白质的特性 ◆ 相关概念勿混淆 变性/复性  变性/沉淀  变性/降解  变性/变构 ◆6.蛋白质的呈色反应 ◆双缩脲反应 ◆福林酚反应 ◆考马斯亮蓝结合反应 ◆7. 紫外吸收280nm 它们的应用？ 第六节 ： 蛋白质的重要性质 一、蛋白质的分子量 二、蛋白质的胶体性质 三、蛋白质的两性解离及等电点 四、蛋白质的沉淀反应 五、蛋白质的变性与复性 六、蛋白质的呈色反应 七、蛋白质的紫外吸收 第一节 蛋白质的元素组成  第二节 蛋白质的构件单元  —— 氨基酸  第三节 肽 第四节 蛋白质的分子结构 第五节 蛋白质结构与功能的关系  第六节 蛋白质的理化性质 第七节 蛋白质的分离提纯 第二章 蛋白质 第七节  蛋白质的分离提纯及应用 一、蛋白质分离提纯  的基本思路 二、分离纯化技术  的基本原理 三、纯度鉴定、分子量的测定 一. 蛋白质分离提纯  的基本思路 目标蛋白/有效成分 检测方法的建立-选材-前处理/抽提-粗分级-精/细分级-鉴定/(结晶)-保存 低温、操作力度的把握 检测方法的建立： 含量测定： 活性测定： 差异入手：以最少的步骤完成纯化 粗分级：大量差异大的杂质的去除 精细分级：性质差异细小的杂质的去除 粗分级 - 精/细分级： 一、沉淀 丙酮沉淀 盐析 等电点沉淀 免疫沉淀 二、透析及超滤 透析(dialysis) ：利用透析袋将大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。 超滤: 利用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留量的超滤膜，达到浓缩蛋白质的目的。 三、电泳（electrophoresis） ? 利用蛋白质何种性质 四、层析(chromatography) ? 利用蛋白质何种性质 Principles of Operation for Chromatography Techniques Gel Filtration Ion Exchange Hydrophobic Interaction Affinity Reversed Phase 五、超速离心(ultracentrifugation) ? 利用蛋白质何种性质 Density gradient centrifugation Differential (speed) centrifugation: Sedimentation coefficient (s) 第七节