实验五大肠杆菌感受态细胞的制备.ppt

实验3 大肠杆菌感受态的制备.ppt 电泳检测PCR扩增产物电泳检测回收产物实验三 大肠杆菌感受态细胞的制备（CaCl2法） 1. 实验目的 2. 实验原理 3. 实验仪器、材料与试剂 4. 实验步骤 5. 注意事项实验目的掌握CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞的原理，学会制备感受态细胞的方法。实验原理用于感受态细胞制备的大肠杆菌菌株一般是限制-修饰系统缺陷的变异株。受体细胞经过一些特殊方法（如：电击法，CaCl2等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许带有外源DNA的载体分子进入的感受态细胞。实验仪器、材料与试剂（一）仪器 1. 恒温摇床 2. 超净工作台 3. 高压灭菌锅

2018-01-18 约小于1千字 14页立即下载

大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒的转化.pptx 感受态的制备和质粒的转化;材料及方法 CaCl2法制备感受态的原理 感受态细胞的制备 质粒的转化转化子的筛选 ; 材料及方法菌种：大肠杆菌BL21菌株质粒：pGEX-6P-1 感受态制备方法：CaCl2法转化方法：热激法 ;CaCl2制备感受态的原理: 细菌处于0℃，CaCl2的低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热冲击处理，促使细胞吸收DNA复合物。;感受态的制备;离心弃上清;质粒的转化;转化子的筛选;转化率转化后在含抗

2019-03-30 约小于1千字 10页立即下载

大肠杆菌感受态细胞的制备与转化.doc 本实验以E.coli DH5a菌株为受体细胞，并用CaCl2处理，使其处于感受态，然后与pBS质粒共保温，实现转化。由于pBS质粒带有氨苄青霉素抗性基因（Ampr），可通过Amp抗性来筛选转化子。如受体细胞没有转入pBS，则在含Amp的培养基上不能生长。转化子扩增后，可将转化的质粒提取出，进行电泳、酶切等进一步鉴定。详细实验方法 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化实验材料 E. coli DH5α菌株 pBS质粒DNA 试剂、试剂盒 LB固体培养基 LB液体培养基 Amp 麦康凯培养基 CaCl2 快速感受态细菌制备试剂盒仪器、耗材 eppendorf管恒温摇床电热恒温培养箱台式

2017-08-20 约3.33千字 5页立即下载

3大肠杆菌感受态细胞制备及转化规范.ppt 自前往后分别为：超螺旋、线性及开环质粒DNA 实验四大肠杆菌感受态制备及外源DNA的转化实验目的 1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。 2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。 3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。实验原理转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。外源DNA导入细菌的几种方法（1）转化（transformation) 感受态细菌捕获质粒DNA的过程（2）转染（

2017-03-19 约2.72千字 23页立即下载

大肠杆菌感受态细胞的制备及转化实验原理及步骤.pdf 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化实验原理及步骤--第1页 实验五大肠杆菌感受态细胞的制备及转化一、实验原理体外连接的重组DNA分子导入合适的宿主细胞中才能大量的进行复制、增殖和表达。研究发现，用含Ca2+的溶液处理大肠杆菌细胞会易于吸收外源 DNA。大肠杆菌吸收外源DNA的过程被称为转化。细菌处于容易吸收外源DNA的状态称为感受态。用理化方法可以诱导细胞进入感受态，如电转化法、CaCL2 法。 CaCL2法是目前实验室常用的制备感受态细胞的方法，其原理是使细菌处于0°C、CaCl2低渗溶液中，细胞膨胀成球形，细胞膜的通透性发生改变，外源DNA附着于细胞膜表面，经42°C短时间热冲击处

2024-10-13 约4.12千字 4页立即下载

大肠杆菌感受态细胞.ppt 大肠杆菌感受态细胞的制备、重组;1.实验目的和要求通过本实验;2.相关知识及原理感受态细胞;转化〔transformati;转化的方法：化学的方法(热击法;克隆的筛选：主要用不同抗生素基;将经过转化后的细胞在选择性抗生;重组质粒克隆的鉴定鉴定带有重组;?-互补现象：因为有些载体都带;由互补产生的?－半乳糖苷酶(L;无标题;重组DNA转化细菌过程示意图;3．仪器、材料和试剂无菌超净台;4．操作步骤1〕大肠杆菌感受;〔2〕每组取培养液3个2ml转;〔6〕弃去上清液，参加100μ;2〕细胞转化(1)分别取;(2)将以上各样品轻轻摇匀，;3)平板培养〔有时需要稀释〕;(2)菌液完全被培养基吸收后;4)

2024-12-01 约小于1千字 23页立即下载

25生物化学实验--大肠杆菌感受态细胞的制备及重组质粒的转化.doc 大肠杆菌感受态细胞的制备及重组质粒的转化【目的】 1. 掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的实验方法和技术。 2. 熟悉大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的实验原理。【原理】 1. 大肠杆菌感受态细胞的制备、转化原理细菌的生物学特性由于吸收外源 DNA 发生可遗传的改变叫转化，在基因克隆技术中，转化（ transformation ）特指以质粒 DNA 或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转染（ transfection ）是指噬菌体、病毒或以它为载体构建的重组子导入细胞的过程。未经特殊处理的宿主细胞较难进行转化，细菌处于容易吸收外源 DNA 的状态叫感受态，用理化方法诱导细

2017-02-02 约4.23千字 6页立即下载

大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法JinLab.doc 大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法 (Jin Quan-Wen Lab at XMU) 一、大肠杆菌电转化感受态细胞制备：第一天： 1. 用枪头或接种环挑取单 HYPERLINK /Search.asp?Field=TitleClassID=keyword=克隆克隆菌落，接种入盛有5ml LB液体培养基的 HYPERLINK /consumables/list.asp?sortid=7typeid=88 \t _blank 培养管中，可以准备两管。37?C，220rpm，培养过夜（14-16个小时）。 2. 高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）和几个50ml离心管，以备

2017-04-16 约3.11千字 3页立即下载

大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法(JinLab).docx 大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法 (Jin Quan-Wen Lab at XMU) 一、大肠杆菌电转化感受态细胞制备：第一天：用枪头或接种环挑取单克隆菌落，接种入盛有5ml LB 液体培养基的培养管中，可以准备两管。37?C，220rpm，培养过夜（14-16 个小时）。高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）和几个 50ml 离心管，以备第二天离心收集细菌用。准备几瓶灭菌水（总量约 1.5 升），保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细菌细胞用。第二天：取 2-5ml 过夜培养液，接入 500ml LB (或 2XTY)液体培养基中, 控制起始OD600= 0,03-0,05。

2022-03-31 约2.7千字 2页立即下载

大肠杆菌感受态细胞的制备、质粒DNA的转化和重组子筛选.pdf 大肠杆菌感受态细胞的制备、质粒DNA的转化和重组子筛选分子生物学实验牛卫宁目的要求 1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。 2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。 3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选重组子的方法。实验原理转化( Transformation )是将异源DNA 分子引入另一细胞品系，使受体细胞

2017-09-18 约4.05千字 21页立即下载

【2017年整理】DNA重组、大肠杆菌感受态细胞的制备及转化.doc PAGE PAGE 1 DNA重组、大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 DNA重组 DNA重组（基因重组）是指，由不同DNA链的断裂和连接而产生DNA片段的交换和重新组合，形成新DNA分子的过程。原核生物的基因重组有转化、转导和接合等方式。受体细胞直接吸收来自供体细胞的DNA片段，并使它整合到自己的基因组中，从而获得供体细胞部分遗传性状的现象，称为转化。通过噬菌体媒介，将供体细胞DNA片段带进受体细胞中，使后者获得前者的部分遗传性状的现象，称为转导。自然界中转导现象较普遍，可能是低等生物进化过程中产生新的基因组合的一种基本方式。高等动植物中的基因重组通常在有性生殖过程中进行，即在性细

2017-01-14 约4.02万字 46页立即下载

《分子生物学研究技术》第1章第6节大肠杆菌感受态细胞的制备和转化.pptx 第六节大肠杆菌感受态细胞的制备和转化;2;3;4;5;6;7;8;9;10;11;12;2）将待检细菌接种到平板上，用接菌环或牙签划线接种，;14;15;16;DNA;Figure4.18.RecombinantselectionwithpBR322.Seetextfordetails. Theinsetshowshowreplicaplatingisperformed.;19;20;21;22;23;24;25;26;27;28;29;维用素影滤印膜铺上板的器细复菌印菌生落长在硝酸纤30;2．方法2;4）有几种方法选择：;（三）菌落的裂解及DNA结合于硝酸纤维素滤膜;2）用平头镊子把硝酸

2025-04-19 约小于1千字 40页立即下载

制备和转化感受态大肠杆菌的Inoue方法总结..doc Inoue法制备感受态大肠杆菌总结培养基的准备 SOB培养基： 100ml 胰化蛋白胨 2 g 酵母提取物 0.5 g NaCl 0.05 g 250mM KCl 1 ml 高压灭菌使用前加 2mol/L MgCl2 0.5 ml SOB琼脂板（含20mmol/L MgSO4 和20mmol/L 氨苄） 100ml 胰化蛋白胨 2 g 酵母提取物 0.5 g NaCl 0.05 g 琼脂 1.5 g 250mM

2017-01-10 约小于1千字 5页立即下载

大肠杆菌感受态的制备及重组DNA的转化.pdf 中国试剂网 3.13.11.17 大肠杆菌感受态的制备及重组 DNA 的转化 1．感受态的制备 （1）接种单菌落于2ml LB 培养液中， 37 ℃过夜。（2 ）取0.25ml 过夜菌入 25ml LB 培养液中，37℃振摇4～6h 至 A590=0.4～ 0.6 。（3 ）倒入50ml 管内，水浴 10min，以2500～3000rpm 离心 5min，弃上清。（4 ）缓慢加入

2015-09-03 约小于1千字 1页立即下载

大肠杆菌HB101感受态细胞的显微观察与分析.pdf 第卷第期武汉大学学报理学版 ! # $ % )! )# ’( *’ 年月 #++# ! - -$ - - -% -#++#?#@AB#@C

2017-05-11 约2.46万字页立即下载

实验五 大肠杆菌感受态细胞的制备.ppt

实验五大肠杆菌感受态细胞的制备.ppt