肉與肉制品中氯霉素含量测定—气相色谱法和酶联免疫法.doc

肉与肉制品氯霉素含量的测定 ——科标检测 肉类食品是最富有营养的食品之一，含有大量的全钾蛋白质、脂肪、糖类、矿物质和维生素，而且味道鲜美，吸收率高，所以深受人们的喜爱。但是肉类食品在生产过程中，污染源复杂，途径多。2014年7月17日，国家食品药品监督管理总局发布《关于深入开展肉及肉制品检查执法工作的通知》，要求各地要将保障肉及肉制品质量安全作为食品安全工作重点。 科标检测可依据各项国家标准，针对冷、鲜鸡肉、牛肉、猪肉等各类肉及肉制品，提供专业检测服务，以下介绍两种肉与肉制品氯霉素含量的测定方法： 一、气相色谱-质谱法 1、原理 样品中氯霉素用乙酸乙酯提取，脂肪用正己烷去除，经C18净化，BSTFA+TMCS(99+1)衍生后，用NCI源选择m/z为466的特征离子为目标离子，在SIM模式下进行GC-MS测定。 2、试剂和材料 若无特别说明，所用试剂均为分析纯，所用水应符合GB/T6682的要求。 2.1氯霉素：标准品，纯度≥99%。 2.2甲醇：色谱纯。 2.3三氯甲烷。 2.4正己烷：色谱纯。 2.5乙酸乙酯。 2.6无水硫酸钠。 2.7氯化钠。 2.8 N、O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA)。 2.9三甲基氯硅烷(TMCS)。 2.10丙酮：色谱纯。 2.ll甲苯。 2.12甲醇溶液：甲醇+水=2+8。 2.13氯化钠溶液(40g/L)：称取4.00g氯化钠（2.7），用水溶解，定容至100mL。 2.14甲醇一氯化钠溶液：量取甲醇溶液(2.12)20mL、氯化钠溶液(2.13)80mL，混匀。 2.15混合衍生剂：N、O-双三甲基硅烷二氟乙酰胺+三甲基氯硅烷=99+1。 2.16氯霉素标准储备溶液(c=0.1mg/mL)：称取氯霉素标准品0.01g(精确至0.0001g)，用丙酮溶解并定容至100mL。储备液贮存在4℃冰箱中，可使用两个月。 2.17氯霉素标准工作溶液：根据试验需要，用丙酮(2.2.10)稀释标准储备溶液(2.2.17)，配成适当浓度的标准工作溶液。 3、仪器设备 实验室常规设备及下列仪器。 3.1气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)。 3.2分析天平：可准确称重至0.0001g。 3.3分析天平：可准确称重至0.01g。 3.4离心机：5500r/min。 3.5涡旋仪。 3.6同相萃取装置。 3.7旋转蒸发仪。 3.8均质器。 3.9振荡器。 3.10机械设备：用于试样的均质。包括：绞肉机、斩拌机等肉类组织粉碎机。 3.1l氮吹仪。 3.12具塞离心管：50mL、10mL。 3.13 C18固相萃取柱或相当者：200mg，3mL。 4、分析步骤 4.1试样液制备 ①试样的制备 按GB/T 9695.19规定的方法取样。至少取有代表性的试样200g，使用适当的机械设备将试样均质。均质后的试样尽快分析，否则，应密封低温贮存，防止试样变质或成分发生变化。贮存的试样在启用时，应重新混匀。 ②提取 称取10g样品(精确至0.01g)置于50mL具塞离心管中，加入少量无水硫酸钠和30mL乙酸乙酯均质1min，以5000r/min离心5min后，用吸管吸出上层乙酸乙酯于浓缩瓶中，残渣再加入乙酸乙酯15mL重复提取样品，合并提取液。提取液在50℃水浴中旋转蒸发，除去乙酸乙酯，加入lmL甲醇-氯化钠溶液(2.14)和4mL正己烷，充分振摇后，转移至10mL具塞离心管中，用1mL甲醇-氯化钠溶液(2.14)清洗浓缩瓶，合并清洗液于10mL具塞离心管中。涡旋0.5min，经3000r/min离心3min后，用吸管吸去正己烷，加入4mL正己烷重复上述操作。然后在离心管中加入4mI乙酸乙酯，涡旋1min，经3000r/min离心3min后，用吸管吸出乙酸乙酯，加入4mL乙酸乙酯重复上述操作，合并乙酸乙酯于浓缩瓶中，在50℃水浴中旋转浓缩至近干，用5mL水溶解残渣。 ③净化 依次用5mL甲醇、5mL三氯甲烷、5mL甲醇、5mL水活化C18固相萃取柱(14)，然后加入上述步骤得到的提取液，加5mL甲醇+水(2.12)淋洗色谱柱，用25mL甲醇洗脱于浓缩瓶中，洗脱液在50℃下浓缩至近干。用100μL甲醇溶解残渣，并转移至10mL具塞离心管中，再用甲醇冲洗浓缩瓶，合并洗液，于50℃下用氮气吹干。 ④衍生化 于吹干的试样残渣中加入100μL甲苯和100μL混合衍生剂(2.15)，盖紧塞后，涡旋混匀1min，60℃下反应30min，然后在50℃下用氮气吹干，加入1mL正己烷溶解残渣。 4.2标准工作液制备 配制好的标准工作液按4.1.4步骤进行操作。 4.3空白液制备 除不称取试样外，均按4.1步骤进行操作。 4.4测定 ①气相色谱-质谱法测定条件