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第7章蛋白质的分离纯化和表征 华中科技大学 生命科学与技术学院 易 平 第7章蛋白质的分离纯化和表征 第7章 蛋白质的分离、纯化和表征  一、蛋白质的酸碱性质  二、蛋白质分子的大小与形状  三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀  四、蛋白质分离纯化的一般原则  五、蛋白质的分离纯化方法  六、蛋白质的含量测定与纯度测定  本章重点与习题 第7章蛋白质的分离纯化和表征 一、蛋白质的酸碱性质 第7章蛋白质的分离纯化和表征 几种蛋白质的等电点  蛋白质的等电点 指使蛋白质的净 电荷为零的pH 第7章蛋白质的分离纯化和表征 蛋白质的等电点与 酸性和碱性氨基酸含量有关 back 第7章蛋白质的分离纯化和表征 二、蛋白质分子的大小与形状 第7章蛋白质的分离纯化和表征 （一）根据化学组成测定最低相对分子量（Mr） 某元素原子量 最低相对分子质量＝ ×100 该元素百分含量 真实相对分子质量＝最低相对分子质量×N N: 每个蛋白质分子中该元素的原子数目 肌红蛋白含铁量0.335% ，55.8 / 0.335 Χ100 = 16700 ； 肌红蛋白 n=1 ，MW = 16700 ； 血红蛋白 n=4 ，MW = 68000 第7章蛋白质的分离纯化和表征 （二）渗透压法测定Mr（简单，但不能区别蛋白质分 子是否均一） （三）蛋白质的扩散和扩散系数（不能单独用来决定 Mr，但与沉降系数结合起来，可以给出精确Mr） （四）凝胶过滤测定Mr （简单，样品可以不纯） （五）SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定Mr 第7章蛋白质的分离纯化和表征 （六）沉降分析测定Mr  在强大的离心场中，如果蛋白质溶液的密度大于溶液密 度，溶液中的蛋白质会发生沉降。  沉降速度决定于蛋白质的分子量、分子密度、分子形状 和溶剂的密度、粘度。  沉降系数：单位离心场强度时的沉降速度。 2/3 s(未知) Mr (未知) = s(标准) Mr (标准) 第7章蛋白质的分离纯化和表征 Isolating components by centrifugation back 第7章蛋白质的分离纯化和表征 三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 （一）胶体性质（colloi