干制鱼中4-羟基-己烯醛和4-羟基-壬烯醛的测定 液相色谱-串联质谱法.docx

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干制鱼中4-轻基-己燎酵和4-轻基-王燎酵的测定液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了干制鱼中4-羟基-己烯醛（HHE）和4-羟基-壬烯醛（HNE）的液

相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于干制鲅鱼、鲳鱼、鳕鱼、刀鱼等干制鱼可食组织中HHE和HNE

含量的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的

修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试料中的HHE和HNE在盐酸溶液中经2,4-二硝基苯肼衍生后，用二氯甲烷

萃取，再经硅胶固相萃取小柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。

5试剂与材料

除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6628规定的一级水。

5.1试剂与材料

5.1.1乙酸（CH3COOH）：色谱纯。

5.1.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。

5.1.3乙腈（CH3CN）：色谱纯。

5.1.4二氯甲烷（CH2Cl2）。

5.1.5三氯甲烷（CHCl3）。

5.1.6正己烷（C6H14）。

5.1.72，4-二硝基苯肼（C6H6N4O4）。

5.1.82，6-二叔丁基对甲酚（C15H24O）。

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5.1.9盐酸（HCl）。

5.1.10微孔滤膜：0.2“m，有机相型。

5.1.11硅胶固相萃取小柱：6mL/500mg，或相当者。

5.2溶液配制

5.2.11mol/L盐酸溶液：取83.3mL浓盐酸加入到917mL水中，混匀。

5.2.2衍生液：准确称取0.125g的2,4-二硝基苯肼溶于250mL的1mol/L盐酸溶液中，超声至完全溶解。

5.2.3正己烷-三氯甲烷溶液（2+1）：准确量取200mL正己烷和100mL三氯甲烷，混合摇匀。

5.2.4乙酸溶液（pH3.5）：吸取一定量的乙酸于500mL水中，使用pH计调pH?3.5。

5.3标准品

5.3.14-羟基-己烯醛（HHE），浓度为1000mg/L，纯度≥99%；4-羟基-壬烯醛（HNE），浓度为1000mg/L，纯度≥99%，见附录A。

4.3.2内标：4-羟基-己烯醛-d3（HHE-d3），100mg/L，纯度≥99%；4-羟基-壬烯醛-d3(HNE-d3)，100mg/L，纯度≥99%，见附录A。

5.4标准溶液配制

5.4.1混合标准溶液（100mg/L）：分别准确移取1mL浓度为1000mg/L的HHE和HNE标准溶液用无水乙醇定容至10mL。在-18“环境下保存，有效期3周。

5.4.2混合标准工作溶液（10mg/L）：准确移取1.0mL浓度为100mg/L的HHE和HNE混合标准溶液用无水乙醇定容至10mL。在-18“环境下保存，有效期3周。

5.4.3混合同位素内标工作溶液（10mg/L）：分别准确移取1.0mL浓度为100mg/LHHE-d3和HNE-d3同位素标准溶液用无水乙醇定容至10mL。在-18“环境下保存，有效期3周。

6仪器与设备

6.1高效液相色质谱联用仪：配Esl离子源，或其他等同性能设备。

6.2分析天平：感量为0.0001g和0.01g。

6.3干粉研磨机。

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6.4超声波清洗器。

6.5PH计(精确至0.1单位)。

6.6离心机(转速不低于10000r/min)。

6.7具塞塑料离心管：50mL。

6.8高速匀浆机。

6.9涡旋混合仪。

6.10氮吹仪。

7试料的制备与保存

7.1试料的制备

取适量空白或供试组织，破碎，并使均质。

a取均质的供试样品，作为供试试料。

b取均质的空白样品，作为空白试料。

c取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

7.2试料的保存

-18“以下保存，3周内进行分析检测。

8测定步骤

8.1水解与衍生化

取试料2g（精确至±0.01g）于50mL聚丙烯离心管中，依次加入25mg2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT），50μL的混合内标溶液（