苦荞对灵芝发酵生产灵芝酸的影响.docx

技苦荞对灵芝发酵生产灵芝酸的影响王玉红丁重阳章克昌术(江南大学生物工程学院生物资源研究室,无锡,214036)(江南大学工业生物技术教育部重点实验室,无锡,214036)摘要研究了苦荞的添加对灵芝酸发酵的影响。结果证明,苦荞有利于灵芝发酵液中灵芝酸的产生,从而间接地证明灵芝对苦荞的生物转化可能会有增效作用。关键词灵芝,灵芝酸,苦荞,HPLC柴可夫斯基反应(Salkowaki)4灵芝酸是近年来发现的灵芝中除多糖外的另一类具有明显药理活性的化合物,有止痛、镇静、抑制组织胺、解毒、保肝、毒杀肿瘤细胞等功能1。在化学结构上属于四环三萜类化合物,是由2个分子的焦磷酸合欢酯(EPP)尾接尾缩合成鲨烯酯,经闭和转位成三萜化合物,其分子中含有羧基的统称为灵芝酸2。苦荞麦俗称苦荞,是一种药食两用植物,具有降压降脂的功能。通过向培养基中加入苦荞有可能增强灵芝的特殊疗效。文中研究了苦荞的添加对灵芝发酵生产灵芝酸的影响。11611取少量样品溶于适量CCl4中,沿试管壁加入到浓HSO中,若两液面交界处变为深红色或棕红24色,说明有三萜类化合物存在。11612李伯曼反应(Libermann2Burchard)4取少量样品溶于适量醋酐中,沿试管壁加入到浓H2SO4中,若两液面交界处呈红色并逐渐变为深绿色,说明有三萜类化合物存在。11613HPLC分析3色谱柱为LichroCARTR○250—4(C18柱),紫外检测波长为254nm,流动相缓冲液见表1。1材料与方法111菌种灵芝(Ganodermalucidum):本实验室筛选保存。112种子培养斜面培养基:PDA。液体种子培养基:酵母膏1%,蛋白胨1%,葡萄糖2%,pH自然。液体种子培养方法:250mL摇瓶装量100mL,接种2～3块黄豆粒大小的斜面菌块,置于旋转式摇床,转速150min,30℃培养7d。113深层发酵基础培养基:同种子培养基。苦荞培养基:基础培养基中适量添加苦荞。114发酵液中灵芝酸的提取有机溶剂提取法。115灵芝酸的萃取[3]取浓缩过的提取液→水饱和正丁醇萃取3次→合并萃取液→真空蒸干→粗灵芝酸116灵芝酸的定性分析5,611614灵芝酸的测定将提取的灵芝酸样品溶于适量的甲醇,以甲醇为空白在紫外分光光度计上测定吸光度,粗灵芝酸含量由下式计算灵芝酸(g/L)=(A×011317-010028)×0175×n式中A为OD值;n为稀释倍数。表1HPLC的流动相缓冲液时间/min流速/mL·min-1A/%B/%开始101010151115121012152010110110110110115115115100540001001000461001001000020151101000A液:11145mL无水乙酸钠溶于1L超纯水中,取此液940mL加入色谱纯乙腈60mL;B液:取600mL乙腈,加超纯水至1000mL。第一作者:硕士研究生,助理工程师。收稿时间:2002-10-3095实用技术食品与发酵工业Vol129No19FoodandFermentationIndustries2结果与分析211不同方式添加苦荞对灵芝酸生成的影响苦荞的营养丰富,将其按A、B、C、D不同的方式加入到灵芝的培养基中,对灵芝酸的发酵有一定的影响。其结果见表2。表2不同添加方式对灵芝酸的影响添加方式灵芝酸/g·L-1图1A的粗灵芝酸的HPLC图A(对照)BC011340113701168D01243从表2中可看出,B、C、D的灵芝酸含量都比对照高,尤其是D的灵芝培养液中灵芝酸含量明显增加。可见,苦荞对灵芝发酵产灵芝酸有一定的促进作用。212苦荞添加量对灵芝发酵的影响(表3)表3在培养基中添加不同比例的苦荞对灵芝发酵的影响图2B的粗灵芝酸的HPLC图苦荞加入量/%84h96h发酵液pH值灵芝酸/g·L-1发酵液pH值灵芝酸/g·L-1胞外胞内胞外胞内01001511011521041204126412041154116010890119301150011790113301148012270123601248012303198411241063199412201128011470116601153011510123901206012940133801246图3C的粗灵芝酸的HPLC图由表3的结果可看出,加115%苦荞时,灵芝酸的含量最高,同时可看出,胞内(菌丝体)的灵芝酸含量远高于发酵液中含量。213定性分析将得到的灵芝酸提取液分别进行柴可夫斯基反应(Salkowaki)和李伯曼反应(Libermann2Burchard),两液面交界处都呈现颜色反应,说明有三萜类化合物存在。214HPLC分析马礼金3等利用Thymol作外标,在紫外检测波长为254nm处,对灵芝酸子实体及菌丝体中的灵芝酸进行了高压液相分析,得出了7个明显