发芽糙米与稻谷的谷氨酸脱羧酶活力及γ氨基丁酸含量比较.pdf

(2)样品溶液的制备及其异黄酮含量的测定 发芽糙米与稻谷的谷氨酸脱羧酶活力及丫．氨基霪蓁羹霎冀蓁妻 采用抽滤方法收集固定化细胞珠粒，蒸馏水冲洗 干净并经研磨破碎，加入70％乙醇，超声振荡处理60 鹫囊囊 港盟罂 蹬蒌艾 鬟笪鋈 羹鋈雾 再静置浸提24 min， h以上，浸提液经0．45弘m滤膜 i萋灞萎冀需墅辇霎雾Ⅳ掣霪；国湖淄强囊蓄萎羹笺藿法■治窭凭羹霪礴鋈馕鬟j劾震=囊i盹霉|l 过滤，采用HPLC法测定细胞样品中异黄酮含量，色 谱条件同 (1)。 瞄 娄 菱霎霪薹冀薹薹羹萎雾羹艺羹薹需鸢萎茎嘲塞萎薹霎蓁鬟冀鋈奏薹璧i妻夔i蠹萋。蠢薹攀妻萋l霉螽一 1．3．6．3 固定化细胞培养体系中异黄酮总量的计算 翳l鋈錾霆霄；妻i毫!囊薹蚕篓薹囊!萎鋈蠢雾i羹疆装雾霾薹；i垂妻；i的培养 取200粒固定化细胞微囊[初始接种量约0．8g 异黄酮总 mL 培养基的250 g)×细 (Fw)]，接种于装有50mL新鲜B5 摇瓶中进行振荡培养，培养条件：(25±1)℃，闭光， ×培养液体积(L) 110r／min。每2d取样1次，测定相应指标。 2结果与分析 1．3．4 细胞生长曲线的测定 采集的细胞样品经蒸馏水冲洗干净，测定细胞鲜 2．1野葛固定化培养细胞的生长特性 重。以每瓶细胞培养物的鲜重表示培养过程中的生 取固定化细胞微囊进行悬浮培养，定期收集细胞 长变化， 每2d测定1次，每次收集3瓶，求平均值， 珠粒，测定野葛固定化细胞鲜重的变化情况，并绘制 0 细胞生长 曲线。由图1可知，野葛细胞生长曲线呈 共观察2 d，绘制细胞生长曲线。细胞生长过程的参 数处理参照应佩青等[15]的方法，每天测得的细胞鲜 “S”形，可分为3个主要阶段，即迟滞期(0～8d)、指 数生长期 (8～14d)和稳定增长期(14～18d)。在培 重表示为 x，生物质量浓度Cx=X／V，其中，V为 培养物总体积；细胞的生长速率可近似表示为 养的第18天达到了最大生物量(48．56g(Fw)／L)， dCx／d￡≈△Cx／△￡。 约为初始接种量的3．035倍；此后开始下降。在野葛 1．3．5培养液中残糖含量的测定 固定化细胞培养过程中，至培养的第14d，细胞培养 采用硫酸苯酚法测定培养液中糖含量u6|。 液开始发生轻微褐化现象，此后褐化情况逐渐加重。 1．3．6异黄酮含量的测定 根据野葛细胞生长曲线的测定结果及细胞培养过程 1．3．6．1胞外黄酮含量的测定 中的培养反应情况，确定野葛固定化细胞培养的最佳 固定化培养物通过抽滤方法进行样品收集，滤液 继代周期为14～16d。 浓缩至干 ，溶剂萃取，并作适当稀释，采用紫外分光光 度法测定样品溶液异黄酮含量，3次重复。测定条 言 件：以葛根素为对照品并制作标准曲线，线性范围