实验一α-淀粉酶活力的测定讲述.ppt

* 实验一 α-淀粉酶活力的测定 [实验性质] 验证性实验 [实验学时] 2学时 [实验目的] (1) 掌握淀粉酶糖化淀粉的原理； (2) 掌握淀粉酶的性质及作用； (3) 熟练α-淀粉酶活力测定方法。 [实验原理] α-淀粉酶催化淀粉水解生成小分子可溶性糊精和少量的麦芽糖、葡萄糖，这些产物与碘反应呈现不同的颜色。通过呈色反应，可了解底物的降解速率，并以此可反映酶活力。 [实验设计要求] 1. 按照给定的实验方法，以可溶性淀粉为实验材料测定α-淀粉酶活力大小。 2. 实验要设置3次重复。 [实验材料与试药] 1. 实验材料 可溶性淀粉、α-淀粉酶。 2. 主要试药 结晶碘、碘化钾、磷酸氢二钠、柠檬酸、氯化钴、重铬酸钾、络黑T等。 [仪器设备] 电子天平、恒温水浴锅、温度计、酸度计、抽滤机等。 [器皿及耗材] 1 1 1 2 1 2 2 1 1 2 2 50 mL 100 mL 150 mL 250 mL 500 mL 1000 mL 500 mL 0.5 mL 1 mL 2 mL 5 mL 20 mL 容量瓶 试剂瓶 移液管 大肚移液管 若干 2 1 1 1 2 5 1 1 1 11 1 1 50 mL 100 mL 250 mL 50 mL ∮10 cm 250 mL 250 mL ∮10 cm 25 mL 100 mL ∮2.5 cm 称量纸 烧杯 量筒 滤纸 玻璃棒 洗涤瓶 抽滤瓶 瓷漏斗 比色管 试管 试管架 数量 规格 名称 数量 规格 名称 [试剂配制] (1) 原碘液 称取分析纯结晶碘ll g，分析纯碘化钾22 g。先用少量蒸馏水使碘化钾完全溶解，再溶解结晶碘，最后用蒸馏水定容至500 mL，贮于棕色试剂瓶内暗藏。 (2) 稀碘液 取原碘液2 mL，加碘化钾20 g，加蒸馏水溶解定容至500 mL，贮于棕色试剂瓶内暗藏。 (3) 0.02 mol/L磷酸氢二钠——柠檬酸缓冲溶液(pH6.0) 称取磷酸氢二钠45.23 g和柠檬酸8.07 g，用蒸馏水溶解定容至1000 mL，配好后应以酸度计校正pH值为6.0，置试剂瓶冷藏。 (4) 标准终点色溶液 A液：称取分析纯氯化钴12.0732 ｇ和分析纯重铬酸钾0.1463 g，以蒸馏水溶解定容至150 mL，置250mL试剂瓶暗藏。 B液：称取络黑T 8.0000 mg，以蒸馏水溶解定容至100 mL，置250 mL试剂瓶暗藏。 第一步：待测酶液的配制； 第二步：标准色的配制； 第三步：样品的酶解反应； 第四步：计算。 [实验步骤] 1. 待测酶液的制备 A液 B液 2. 标准色的配制 3. 样品测定步骤 混合液 缓冲液 淀粉液 60℃ 酶液 酶液 60℃,30 min 60℃,5 min 5 mL 20 mL 60℃ 30 s 60 s 90 s 120 s 180 s 210 s 0.5 mL 0.5 mL 碘液 ① ② ④ ⑤ 1. 5 mL 2.0 mL 8.0 mL 1.0 mL 50 mL 1.000 g 250 mL ⑥ 150mL α-淀粉酶 50mL 溶解 10 mL 可溶性淀粉 2.0g 煮沸 冷却 100 mL 2%淀粉液 ③ ⑦ α-淀粉酶活力 1 g酶粉(或l mL酶液)在60℃、pH6.0条件下， 以1 h(60 min) 液化可溶性淀粉的克数(或毫克数)为1酶活力单位，即1IU，单位为可溶性淀粉量(g) /mL·min。 60 —酶活定义中反应时间为60min； T —反应时间（min）； 20 —可溶性淀粉的毫升数； 2% —可溶性淀粉浓度； N —酶液稀释倍数； 0.5 —测定时所用的稀酶液量（ml）。 酶活力单位（g/ml）=(60/T×20×2%×N)÷0.5 [实验结果计算] Ⅲ Ⅱ Ⅰ 酶活力(g/ mL·min) 反应时间(min) 重复数 表 1 α-淀粉酶活力测定结果 1. 结果要取平均值，并以标准差表示实验结果。 2. 要求实验过程中淀粉的颜色变化过程录像或 颜色变化终点要照像，并多媒体型实验结果 单独标注班级和小组名提交或图片型实验结果 直接写入在实验报告书里。 [实验结果处理要求] 实验报告书的编写要参考教师提出的写作格式规范。 即：题目、作者（包括同组成员）、单位