淀粉酶活力的测定.pptx

实验七淀粉酶活力的测定

一、实验目的掌握测定淀粉酶活力的原理和基本方法

二、实验原理酶是一种具有高度专一性的催化剂。其催化能力的大小用酶的活力来表示。酶活力也称酶活性，是以酶在最适温度、最适pH等条件下，催化一定的化学反应的初速度来表示。

本实验是以一定量的α-淀粉酶液，于37℃、pH6.8的条件下，在一定的初始作用时间内将淀粉转化为还原糖，然后通过与DNS试剂作用，比色测定求得还原糖的生成量，从而计算出酶反应的初速度，即酶的活力这里规定，一个淀粉酶活力单位为在37℃、pH6.8的条件下，每分钟水解淀粉生成1mg还原糖所需要的酶量。U=1mg还原糖/min·mL酶

三.材料及设备1、材料淀粉酶液（粗酶液、盐析液、脱盐液）2、仪器分光光度计??恒温水浴??沸水浴3、器材 刻度试管：?25mL×17 移?液?管：?1mL×3（取稀释后的酶液）烧????杯：250mL×1 滴????管：?2 洗?耳?球：?2 洗瓶、试管架、移液管架、玻棒：各1移液器：专取NaOH注射器：专取蛋白样品

淀粉溶液（0.5%）称取5g可溶性淀粉，溶于1000mL热水中。3,5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）磷酸缓冲液（0.1mol/L，pH6.8），含0.3%NaCl123NaOH溶液（2.5mol/L）4四、试剂的配制

取硫酸铵沉淀法纯化蛋白质实验中获得的粗酶提取液解冻，取上清液0.05mL，加蒸馏水稀释到25mL，摇匀备用取硫酸铵沉淀法纯化蛋白质实验中获得的盐析蛋白质解冻，取上清液0.05mL，加蒸馏水稀释到25mL，摇匀备用取葡聚糖凝胶层析脱盐获得的蛋白液解冻，取0.05mL，稀释。收集1管的同学，将0.05mL稀释到15mL收集2管的同学，将0.05mL稀释到10mL淀粉酶的制备五.步骤

试管排列顺序空白F1B3B2F3?F2?F1?B3?B2?B1F3F21淀粉32B1?粗酶液盐析脱盐0时刻5min时刻装约20mL淀粉溶液，标记，转至37℃水浴锅中因淀粉中含有少量还原糖，某些溶液有色素、杂质，需查看酶不水解淀粉的情况37℃室温

六.??结果处理1、分别计算0时刻、5min时刻的A540nm平均值。2、根据图表中的实验结果，并利用实验“3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的含量”中制作的标准曲线，计算淀粉酶的活力。需要详细过程。5min时刻吸光值0min时刻吸光值5min时刻还原糖mg数0min时刻还原糖mg数二者相减，计算酶活力。1U=1mg还原糖/min·mL酶*稀释倍数

在测定酶活力时应注意哪些反应条件？为什么？本实验中两次加入NaOH溶液的意义是什么?七.思考题

01三种酶活力大小顺序是怎样，为什么是这样？02酶液的稀释倍数是否要改变。03计算酶液的总活力、回收率。八、分析