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唾液淀粉酶的性质和活力测定

一．实验目的

一1通过唾液淀粉酶性质的测定;了解酶的专一性和多种因素对酶粗反

应的影响;pH;底物浓度;温度;激活剂;抑制剂等

2学习酶活力;酶活力单位;比活力的测定;加深对概念的理解；

3学会用考马斯亮蓝法测定蛋白质的含量;学会用3;5-二硝基水杨酸

测定还原糖的含量;熟练操作分光光度计..

二．实验试剂和器材

器材：可见光分光光度计;试管;移液管;恒温水浴锅;pH试纸;1000ml

容量瓶和100ml的容量瓶各一只；

药品：可溶性淀粉;考马斯亮蓝试剂G-250;3;5-二硝基水杨

酸;NaoH;HCL;标准牛血清白蛋白溶液;醋酸;醋酸钠;蒸馏水;95%乙醇;85%

磷;；0.15molNaCL/ml;0.15mol/L硫酸铜溶液;碘化钾–碘溶液：将碘化钾

20克和碘10克溶解在100ml水中;使用前稀释10倍..

注：1考马斯亮蓝G-250试剂：考马斯亮蓝试剂G-250100mg溶于95%

乙醇中;加入100ml85%磷酸;加水稀释至1000ml;过滤即可..

2标准牛血清白蛋白溶液：结晶牛血清白蛋白用凯式定氮法测蛋白含

量;根据其纯度用0.15mol/LNacl配置成0.1mg/L的蛋白液；

3配置0.01%g/ml;0.1%g/ml;;0.5%g/ml;1%g/ml;2%g/ml;3%g/ml的的

溶性淀粉溶液;

4配置一系列pH2的缓冲溶液

0.2Mol/L磷酸氢二钠溶液为28.40g/L;Mr=141.98;称取2.84g溶于

100ml的水中

0.1Mol/L柠檬酸溶液21.01g/l;Mr=210.14;称取2.1溶于100ml水中；

锥形瓶0.2Mol/L磷酸氢二0.1Mol/L柠檬缓冲液

号钠毫升酸毫升pH

10.419.602.2

24.1115.893.0

37.7112.294.0

410.309.705.0

511.158.855.4

612.097.915.8

713.226.786.2

814.555.456.6

916.473.537.0

1018.171.837.4

1119.150.857.8

1219.450.558.0

5配置0.15mol/L的NaCL溶液和0.15mol/L硫酸铜溶液

三．实验步骤

一

1pH的对酶的影响

1）葡萄糖标准曲线的制定

准确称取100mgAR纯