唾液淀粉酶最适pH值的测定实验(设计性实验).pdf

唾液淀粉酶最适pH值的测定实验

实验目的：1掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告

2．掌握唾液淀粉酶最适PH的测定原理和方法。

3.熟悉影响酶促反应速度的因素。

实验原理：1酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、PH、激动剂和抑制剂等。

上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响，可用定性或定量的反应来观

察。利用碘与淀粉机器不同程度纾解产物反应的颜色，来衡量酶促反应的速度的快慢。

蓝色—紫红色—黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。此为定性观察。

2.进一步利用郎伯—比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。

由于在被水解的程度也不一样。当唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，吸

收波长位于660nm处。不同PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也

不同。因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解PH对酶促反应的影响，吸光度

最小的溶液其PH即为唾液淀粉酶的最适PH。

仪器材料和试剂药品：

仪器材料：方盘，试管架，中试管，毛刷，吸耳球，玻璃铅笔，小烧杯，白瓷板，坐标

纸，漱口杯。0.1ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml刻度吸管，胶头滴管，37

C恒温水浴箱，分度计，电磁炉。

试剂药品：0.02％淀粉溶液.0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液碘

液；称取碘1g,碘酸钾2g，溶于300ml蒸馏水中。

实验步骤：

1、缓冲液的配置：根据下表[5]，配置各个pH值的缓冲溶液各10ml

pH值

6.06.26.46.66.87.07.27.47.67.88.0

磷酸氢二钠12.318.526.537.549.061.072.081.087.091.594.7

磷酸二氢钠87.781.573.562.551.039.028.019.013.08.55.3

2、唾液的获取：[6]

a.吐取法：蒸馏水漱口,然后用舌尖抵住上额或下额齿根后,微低头.轻启双唇，将下嘴

唇搁在烧杯边缘，让唾液自然流入试管中.

b.实验者先把痰咳尽，用蒸馏水漱口，清除口腔内的食物残渣，再在口腔内含蒸馏水，

并作漱口运动，3分钟后吐入垫有两层经润湿过处理的脱脂纱布漏斗里，过滤于小烧杯

备用。

c.酸刺激法将。。滴于舌前部，每次4滴，尝试者将舌头后卷，分泌的唾液用吐取法

收集，一般测试5分钟。

唾液的稀释：取10支试管，分别编上号00～09

管号

0123456789

唾液(ml)0.10.10.10.10.10.10.10.10.10.1

蒸馏水(ml)2.04.06.08.010.012.014.016.018.020.0

4、唾液稀释倍数的选取

另取10支试管，分别编上0～9号，各取上述稀释的唾液各1ml，分别加入相应编号的

试管里，向10支试管内同时加入1ml的0.02％的淀粉溶液，振荡混匀后放入37C恒

温水浴5分钟后取出，滴加2～3碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一

支，记录稀释倍数。

5)测量pH：取12支试管，分别标上号1～12，按下表操作

管号

123456789101112

0.02％淀粉溶液(ml)111111111111

2ml缓冲溶液pH6.86.06.26.46.66.87.07.27.47.67.88.0

(保温10min)C37摄氏度

稀释唾液(ml)11111

以蒸馏水调零，用分光光度计测出各试管中溶液的吸光度A值，做好记录。以pH值为横坐标，

吸光度A为纵坐标，在坐标纸上作出平滑曲线，取曲线最低点对应的pH值，即为唾液淀粉酶的最

适pH值。

参考文献：唾液的提取方法ab,选自临床口腔杂志，2008年3月第224期