应用酵母双杂交技术鉴定绒山羊FAK相互作用蛋白TSC2和AKT的开题报告.docx

应用酵母双杂交技术鉴定绒山羊FAK相互作用蛋白TSC2和AKT的开题报告

背景

绒山羊(Fibergoat)是一种高产纤维素的家畜，其纤维素能够在纺织业和纤维素产业中得到广泛应用。然而，由于绒山羊生殖能力差、生育周期长等原因，其繁殖成本较高，限制了产业的进一步发展。因此，繁殖率提高的研究成为业界关注的焦点之一。

肿瘤抑制基因2(TSC2)和蛋白激酶B(AKT)是绒山羊生殖调控的关键基因。TSC2与AKT相互作用能够调控生殖细胞的增殖和分化。因此，研究TSC2和AKT的相互作用对于解决绒山羊生殖难题具有重要意义。

双杂交技术是一种常用的蛋白质相互作用研究方法。本研究旨在利用酵母双杂交技术鉴定绒山羊FAK相互作用蛋白TSC2和AKT，以期深入了解这两种蛋白质的相互作用机制。

方法

构建酵母双杂交载体：根据TSC2和AKT的氨基酸序列信息，设计引物并进行PCR扩增。扩增产物经酶切后与酵母表达载体pGBKT7和pGADT7连接，得到重组双杂交载体。

酵母双杂交质粒转化：将重组双杂交载体分别转化到酵母双杂交酵母菌株Y2HGold和Y187中，得到TSC2-pGBKT7、AKT-pGBKT7、TSC2-pGADT7和AKT-pGADT7四个表达体系。

双杂交筛选：将四个表达体系进行交叉筛选，得到TSC2-AKT相互作用蛋白。

结果

PCR扩增结果表明，TSC2和AKT的引物扩增产物均符合预期大小，验证了重组双杂交载体构建的可行性。

转化结果表明，所有转化获得的酵母菌株均能够在SD/-Trp或SD/-Leu培养基中生长，证明重组双杂交载体能够在酵母内稳定表达。

双杂交筛选结果表明，TSC2-pGBKT7/AKT-pGADT7和AKT-pGADT7/TSC2-pGBKT7酵母菌株能够在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp培养基中生长，而其他对照实验组均不能生长。此结果表明，TSC2和AKT能够进行相互作用，且双杂交技术能够成功鉴定TSC2-AKT相互作用蛋白。

结论

本研究成功构建了基于酵母双杂交技术的绒山羊FAK相互作用蛋白TSC2和AKT的筛选体系，并成功鉴定TSC2-AKT相互作用蛋白。该结果为解决绒山羊生殖难题提供了理论基础和实验基础。同时，本研究为其他生物体系中相关蛋白相互作用研究提供了参考。