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酵母双杂交筛选PAK4相互作用蛋白质及PAK4与P37相互作用的验证的中期报告 研究背景： PAK4是一种重要的蛋白激酶，在许多细胞活动过程中起关键作用。PAK4的功能包括调节细胞运动、细胞极性、细胞周期和细胞凋亡等。因此，PAK4的研究成为当前生物学研究的热点之一。近年来，许多研究发现PAK4与其他蛋白质相互作用，这些相互作用对PAK4的功能具有重要影响。 研究目的： 本研究旨在通过酵母双杂交技术筛选出与PAK4相互作用的蛋白质，并验证其在体内的相互作用。同时，本研究还将重点研究PAK4和P37相互作用的机制。 研究方法： 1. 酵母双杂交筛选：将PAK4 cDNA克隆到酵母表达载体pGBKT7中，构建PAK4的表达质粒。将该载体转化到酵母菌株AH109中，筛选出与PAK4相互作用的蛋白质。 2. 酵母单杂交验证：将筛选出来的蛋白质克隆到酵母表达载体pGADT7中，构建相应的表达质粒。分别将pGBKT7-PAK4和pGADT7-蛋白质两个表达质粒转化到酵母菌株Y187中，通过酵母单杂交验证两者之间的相互作用。 3. 共免疫沉淀：将PAK4和验证出的相互作用蛋白质共表达，然后进行共免疫沉淀实验，验证其在体内的相互作用。 4. 细胞实验：利用荧光共振能量转移技术和Co-IP实验分析PAK4和P37的相互作用关系。 研究进展： 目前，我们已经成功地将PAK4 cDNA克隆到了酵母表达载体pGBKT7中，构建了相应的表达质粒；并将该载体转化到酵母菌株AH109中，开始进行酵母双杂交筛选实验。初步实验结果显示，我们筛选出了一些潜在的与PAK4相互作用的蛋白质。接下来，我们将继续进行酵母单杂交验证和共免疫沉淀实验，以确立这些蛋白质与PAK4的相互作用关系。 同时，我们也已经开始了对PAK4和P37相互作用机制的研究。利用荧光共振能量转移技术和Co-IP实验，我们正在分析PAK4和P37的相互作用关系，并探究其在细胞活动中的生理意义。 研究意义： 本研究将有助于深入了解PAK4在细胞活动过程中的功能，探究与其相互作用的蛋白质及相关分子机制。这将有助于解析细胞活动的分子调控网络和病理生理学机制，为相关疾病的治疗提供新的治疗靶点和治疗策略。