酵母双杂交法筛选与受翻译调节的肿瘤蛋白相互作用的蛋白.pdf

794 　　肿瘤2011 年9 月第31 卷第9 期　TUM OR Vol. 31, September, 2011 DOI: 10.3781/j .issn.1000-7431.2011.09.004 Copyright© 2011 by TUM OR Basic Research 基础研究 · 酵母双杂交法筛选与受翻译调节的肿瘤蛋白相互作用的蛋白 张国寿，罗顺峰，吴燕斌，池闽辉，刘景丰 福建医科大学附属第一医院肝病中心肝外科，福州350004 [摘要]　目的：采用酵母双杂技术筛选与受翻译调节的肿瘤蛋白 （translationally controlled tumor protein ，TCTP ） 相互作用的蛋白，以探讨 TCTP 的生物学功能。方法：采用 PCR 法扩增获得 TCTP 基因，并将其插入酵母双杂 交诱饵载体中构建获得 pDEST32-TCTP ；检测 pDEST32-TCTP 在酵母菌中的表达和 自激活情况，利用酵母双杂 交系统筛选出带有靶蛋白基因的阳性克隆并测序鉴定；免疫共沉淀 （co-immunoprecipitation ，Co-IP ）法验证人肝 癌细胞 Huh7 中TCTP 与细胞 S 期激酶相关蛋白-2 （S-phase kinase-associated protein 2 ，Skp2 ）的相互作用。结果： 成功构建获得酵母双杂交诱饵载体 pDEST32-TCTP ，pDEST32-TCTP 在酵母菌中可以表达 , 且在 3- 氨基 -1, 2, 4- 三唑 （3-amino-1,2,4-triazole ，3AT ）浓度为 20 mmol/L 时无 自激活作用。采用酵母双杂交系统共筛选获得 6 个可 与 TCTP 相互作用蛋白的基因，包括 Smad4 、人热休克蛋白60 （heat shock protein 60 ，HSP60 ）、TAKl 、Bcl-xl 、 卵泡抑素 （follistatin ，FS ）和 Skp2 。其中 Skp2 与 TCTP 蛋白的相互作用在 Co-IP 中得到验证。结论：应用酵母 双杂交系统可筛选获得一组与 TCTP 相互作用的蛋白，为进一步研究 TCTP 的生物学功能提供了可靠的实验依据。 [关键词]　肿瘤；受翻译调节的肿瘤蛋白；酵母双杂交；免疫共沉淀；酵母菌MaV203 [中图分类号]　R575 [文献标志码] A [文章编号]　1000-7431 (2011) 09-0794-06 Screening of candidate proteins interacting with translationally controlled tumor protein by yeast two-hybrid method ZHANG Guo-shou, LUO Shun-feng, WU Yan-bin, CHI Min-hui, LIU Jing-feng Department of Liver Surgery, Liver Center of First Affiliated Hospital, Fujian Medical University, Fuzhou 350004, China [A BST RA CT]　Objective: To screen the candidate proteins interacting with translationally controlled tumor protein (TCTP) by yeast two-hybrid method, and to explore the biological function of TCTP. Methods: TCTP gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and then it was inserted into bait plasmid to construct pDEST32-TCTP. The