利用酵母双杂交技术筛选与转录因子HOXA11相互作用蛋白.pdf

重庆医科大学学报 年第 卷第 期 （JournalofChongqingMedicalUniversity.Vol.No.5） — 443 — 2016 41 5 2016 41 DOI 技术方法 ：10.13406/ki.cyxb.000756 利用酵母双杂交技术筛选与转录因子HOXA11相互作用蛋白 程 1， 2， 2， 2 志 高 蕊 马林强 黄慧哲 （重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室，重庆 ； 重庆医科大学发育生物学研究室，重庆 ） 1. 400016 2. 400016 【摘 要】目的：利用酵母双杂交技术从均一化的人肾透明细胞腺癌cDNA 文库中筛选与转录因子HOXA11 相互作用的蛋白。 方法：培养人肾透明细胞腺癌细胞，提取RNA，采用SMART 技术制备均一化的人肾透明细胞腺癌cDNA 文库。同时，聚合酶链 反应扩增人 基因片段（ ），将此基因片段重组入 载体，构建诱饵质粒 ，经酶切和测 HOXA11 1~846 bp pGBKT7 pGBKT7-HOXA11 序验证质粒构建正确。将诱饵质粒转化酵母菌AH109 ，检测其有无毒性与自激活作用。随后，利用酵母双杂交系统从cDNA 文 库中筛选与HOXA11 相互作用的蛋白。对筛选到的阳性克隆进行回转验证以及测序分析。结果：成功构建了人肾透明细胞腺癌 文库和 诱饵质粒。在 酵母细胞中，该质粒无毒性、无自激活作用。酵母双杂交筛选获得了 个 cDNA pGBKT7-HOXA11 AH109 5 与HOXA11 相互作用阳性克隆。结论：获得人肾透明细胞腺癌细胞中与HOXA11 相互作用蛋白，为进一步研究HOXA11 在个 体发育以及癌症发生发展中的作用机制奠定了基础。 【关键词】 ； 技术；酵母双杂交 HOXA11 SMART 【中图分类号】 【文献标志码】 【收稿日期】 R737.1 A 2015-06-23 Screening of proteins interacting with HOXA11 by yeast two-hybrid system 1 2 2 2 ， ， ， Cheng Zhi Gao Rui Ma Linqiang Huang Huizhe （ ， ， 1. Teaching and Research Section of Cell Biology and Genetics School of Basic Medical Sciences Chongqi