酵母双杂交中诱饵蛋白载体的构建和鉴定方法.pdf

中国生物工程杂志 China Biotechnology ，20 12 ，32 (2):123-127 酵母双杂交中诱饵蛋白载体的构建与鉴定方法* 1 ，2 1 1 ，2 ＊＊ 李尧锋 张楠阳 赵永聚 (1 西南大学动物科技学院 重庆 4007 16 2 重庆市草食动物资源保护与利用工程技术研究中心 重庆 4007 16) 。 ， 摘要 酵母双杂交已是研究蛋白质相互作用的经典方法之一 该方法以真核生物酵母为模型 ， ， 。 在体内研究活细胞内蛋白质的相互作用 具有高度敏感性 被很多研究者采用 综述了酵母双杂 ， 、 。 交系统中诱饵蛋白载体的构建 及其在转化酵母中的毒性 自激活性检测研究的最新进展 关键词 酵母双杂交 诱饵载体 诱饵蛋白 自激活性检测 中图分类号 Q819 ， 随着生物学研究的不断发展 研究蛋白质相互作 1 酵母双杂交系统的基本原理 用的技术日益完善， 。 ， 各种新技术不断涌现 目前 酵母 (yeast two-hybrid system) ， 双杂交 是其中最常见的一种 真核生物中有一种特殊上游激活序列 它能和激 。 20 80 Fields ［1］ ， 方法 该技术在 世纪 年代由 等 在研究 活蛋白结合来大大增加启动子的转录速度 从而在转 。 。 GAL4 真核基因转录调控中首先建立起来的 酵母双杂交系 录水平上对基因表达进行调控 在酵母中 蛋白 ， 、 。 ，Fields 统以真核生物酵母为模型 能够大规模筛选 发现与验 就是这样的一种转录活化因子 基于此 等在对 证在体内的蛋白质间的相互作用， 酵母转录因子 GAL4 ， 1989 同时具有高度敏感 性质的研究中得到启示 在 。 。GAL4 性 酵母双杂交系统对发现研究新的蛋白相互作用并 年提出了酵母双杂交系统 蛋白有两个分离的 ， : N DNA 研究其功能 以及寻找鉴定新的基因等有着广泛的应 功能性结构域组成 即位于 端能特异地结合 结 ［2］。 : ［3］ (DNA binging domain ，BD)［7］ C 用 例如 马海蓉等 用酵母双杂交系统方法首先 构