黄瓜生物胁迫条件下酵母双杂交cDNA文库构建与鉴定.docx

黄瓜生物胁迫条件下酵母双杂交cDNA文库构建与鉴定

目录

黄瓜生物胁迫条件下酵母双杂交cDNA文库构建与鉴定（1）．．．．．．．．4

内容简述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1研究背景．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.2研究意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.3国内外研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

2.1试验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

2.2酵母双杂交系统．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11

2.2.1酵母双杂交原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

2.2.2酵母双杂交方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

2.3cDNA文库构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

2.3.1RNA提取与纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

2.3.2cDNA第一链合成．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

2.3.3cDNA文库构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

2.4生物胁迫条件模拟．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

2.4.1胁迫处理方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

2.4.2胁迫条件设置．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

酵母双杂交cDNA文库鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

3.1文库筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

3.2基因克隆与测序．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

3.2.1克隆载体构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

3.2.2基因克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

3.2.3序列分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

3.3蛋白质表达与功能验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

3.3.1蛋白质表达．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

3.3.2功能验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

结果与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

4.1文库构建结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

4.2酵母双杂交筛选结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36

4.3基因克隆与序列分析结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

4.4蛋白质表达与功能验证结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

黄瓜生物胁迫条件下酵母双杂交cDNA文库构建与鉴定（2）．．．．．．．40

内容描述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

1.2国内外研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

1.3研究内容与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．