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猪γ干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及蛋白活性的研究的中期报告

研究背景：

猪γ干扰素（pIFN-γ）是一种天然免疫调节剂，具有抗病毒、免疫调节、抗肿瘤等生物学活性，因此在医药领域具有重要的应用价值。目前，猪γ干扰素主要通过重组表达技术获得，但其高价值限制了其大规模生产应用。因此，本研究旨在利用毕赤酵母表达系统开发一种简单、高效、低成本的猪γ干扰素生产方法。

研究内容及方法：

本研究以猪γ干扰素为目标蛋白，采用基因克隆技术构建了表达载体pPIC9K-pIFN-γ。将该载体转化至毕赤酵母GS115细胞中，获得了4个高表达株系。在ShakeFlask培养条件下，对这4个株系进行了表达和活性测试。同时，对不同培养条件（包括温度、pH值、培养基配方）的影响进行了优化。

研究结果及分析：

通过Westernblot和ELISA等方法，证实了4个株系中有3个能够在毕赤酵母中高效表达猪γ干扰素。其中最高表达量可达到2.8mg/L。同时，免疫印迹分析表明，表达的蛋白具有正确的分子量和特异性。活性测试结果表明，表达的pIFN-γ对豚鼠纤维单核细胞的增殖有明显的抑制作用，表明其具有良好的生物学活性。此外，对培养条件进行了优化试验发现，30℃、pH值为6.0和YPG培养基是最适合该株系表达猪γ干扰素的条件。

结论：

本研究成功构建了一个高效表达猪γ干扰素的毕赤酵母表达系统，并对培养条件进行了优化。研究结果为大规模生产猪γ干扰素提供了科学依据和技术支持。