融合胸腺素α1的猪干扰素α在毕赤酵母中的表达及效价测定详解.PDF

第３９卷第４期 湖北大学学报（自然科学版） Ｖｏｌ．３９　 Ｎｏ．４　 ２０１７年７月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｕｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ） Ｊｕｌｙ，２０１７　 文章编号：１０００ ２３７５（２０１７）０４ ０３４７ ０７ 融合胸腺素α１ 的猪干扰素α在毕赤酵母中 的表达及效价测定 刘敏，张晨瑶，王飞，翟彦生，肖颖，马立新，余晓岚 （生物资源绿色转化湖北省协同创新中心，湖北大学生命科学学院，湖北 武汉４３００６２） 摘要：猪干扰素α（ＩＦＮ⁃α）是在特定条件下由细胞产生的一种具有广谱、高效抗病毒活性的可溶性糖蛋白，胸腺素 α１（Ｔα１）是一种具有免疫调节的活性肽．本研究中将Ｔα１基因与去掉信号肽序列的猪ＩＦＮ⁃α Ｎ端融合，构建酵母表达载 体ＰＨＢＭ⁃Ｔα１⁃ＩＦＮα，同时构建单独表达ＩＦＮα 的重组质粒ＰＨＢＭ⁃ＩＦＮα，重组质粒电转化至毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）菌 株，甲醛诱导表达．利用ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ法检测融合蛋白的表达，并用细胞病变抑制法测定干扰素的效价．实验结果表明，酵 ６ ７ 母表达上清中ＩＦＮα 的效价为２．９１６×１０ Ｕ／ ｍＬ；Ｔα１⁃ＩＦＮα 的效价为２．８６０×１０ Ｕ／ ｍＬ，该结果证实胸腺素α１可提高融 合表达蛋白猪干扰素的活性，因此，通过酵母表达体系获得高活性胸腺素⁃猪干扰素融合蛋白，可为高效、低成本获得抗 病毒药物提供一种新的模式． 关键词：干扰素；胸腺素Ｔα１；毕赤酵母表达系统；细胞病变抑制法 中图分类号：Ｑ９３９．９１；Ｑ７８２　 　 文献标志码：Ａ　 　 ＤＯＩ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１０００⁃２３７５．２０１７．０４．００４ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｒｃｉｎｅ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ α⁃ｔｈｙｍｏｓｉｎ α１ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ａ ｉｎＰｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ ＬＩＵ Ｍｉｎ，ＺＨＡＮＧ Ｃｈｅｎｙａｏ，ＷＡＮＧ Ｆｅｉ，ＺＨＡＩ Ｙａｎｓｈｅｎｇ，ＸＩＡＯ Ｙｉｎｇ，ＭＡ Ｌｉｘｉｎ，ＹＵ Ｘｉａｏｌａｎ （Ｈｕｂｅｉ Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｇｒｅｅｎ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｏ⁃ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ， Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｈｕｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ４３００６２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐｏｒｃｉｎｅ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ α（ＩＦＮα） ｉｓ ａ ｂｒｏａｄ⁃ｓｐｅｃｔｒｕｍ，ｈｉｇｈｌｙ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ． Ｔｈｙｍｏｓｉｎ ａｌｐｈａ １（Ｔα１） ｉｓ ａ ｋｉｎｄ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｐｅｐｔｉｄｅ． Ｈｅｒｅ，ｗｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｔｈｅｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｖｅｃｔｏｒｐＨＢＭ⁃Ｔα１⁃ＩＦＮα，ｐｕｔｔｉｎｇＴα１ｇｅｎｅｏｎｔｈｅＮｔｅｒｍｉｎａｌ ｏｆ ｐｏｒｃｉｎｅ ＩＦＮα ｇｅｎｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｙｅａｓｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｐＨＢＭ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｗｅｒｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｅｄ ｉｎｔｏ Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ ｓｔｒａｉｎ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｄ ｔｏ ｅｘｐｒｅｓｓ ｂｙ ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ． Ｔｈｅ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ ｍｅｔｈｏｄ． Ｗｅ ｔｅｓｔｅｄ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｃｙ ｏｆ ｆｕｓｉｏｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ