高效液相色谱法原理与应用-.ppt

*样品测定5．计算：由于有些对照品标示含量的方式与样品标示量不同，有些是复合盐、有些含水量不同、有些是盐基不同或有些是采用有效部位标示，检验时请注意。第95页，共136页，星期日，2025年，2月5日*方法研究

1．波长选择：首先在可见紫外分光光度计上测量样品液的吸收光谱，以选择合适的测量波长，如最灵敏的测量波长并避开其它物质的干扰。从紫外光谱中还可大体知道在HPLC中的响应值，如吸收度小于0.5时，HPLC测定的面积将会很小。2．流动相选择：尽量采用不是弱电解质的甲醇-水流动相。第96页，共136页，星期日，2025年，2月5日*3.流动相溶剂具有稳定的化学性质溶剂的选择与使用的检测器要有相容性溶剂的粘度要小溶剂的沸点不能太低溶剂的纯度要高且价格便宜正相：正己烷、正庚烷、乙醚、二氯甲烷、氯仿等，己烷为主体，加入质子接受体乙醚或甲基叔丁基醚，质子给予体氯仿，偶极溶剂二氯甲烷反相：水、甲醇、乙腈、四氢呋喃、乙醇及其混合物等，以水为主体，加入质子接受体甲醇，质子给予体乙腈，偶剂溶剂四氢呋喃。第63页，共136页，星期日，2025年，2月5日*4.影响保留值的因素溶质结构对保留值的影响：正相：溶质极性越强，官能团越多，保留值越大反相：溶质极性越弱，疏水性越强，保留值越大。溶质的保留值与其分子非极性部分的总面积有关，面积大，保留值大。第64页，共136页，星期日，2025年，2月5日*第65页，共136页，星期日，2025年，2月5日*烷基键合固定相特性对保留值的影响：反相：键合相烷链长，k大，选择性好。第66页，共136页，星期日，2025年，2月5日*溶剂性质：正相：溶剂极性越弱，保留越大反相：流动相表面张力大、介电常数大，则极性越强。其斥力越大，溶质与固定相键合越强，保留值越大。第67页，共136页，星期日，2025年，2月5日*盐的影响：通常加入醋酸盐、硼酸盐、硫酸盐等。无机盐使流动相表面张力增大，对非离子性溶质，使k增加，对离子型溶质，k下降。对碱性有机物有改善峰形的作用。pH值：加入酸、碱或缓冲液，控制PH，抑制溶质的离子化，改善峰形。用于分析弱酸、碱。第68页，共136页，星期日，2025年，2月5日*5应用第69页，共136页，星期日，2025年，2月5日*二.液固色谱法

LiquidSolidChromatography1.固定相极性：硅胶、氧化镁、氧化铝等非极性：活性炭、高分子多孔微球、碳多孔微球等2.流动相硅胶为固定相时：以弱极性的正构烷烃为主体，加入二氯甲烷等中等极性溶剂调节合适的洗脱强度。可用水对硅胶进行减活处理，或加入四氢呋喃、乙腈、甲醇、异丙醇等改性剂第70页，共136页，星期日，2025年，2月5日*3.影响保留值的因素样品分子结构溶质分子的官能团极性增加，保留值增加溶质分子的官能团数目增加，保留值增加保留值与溶质的空间效应有关保留值与吸附中心的几何分布有关b．吸附剂吸附剂的孔径越小，表面积越大，保留值越大吸附剂的活性越强，保留值越大，活性由流动相中的含水量来控制c．流动相第71页，共136页，星期日，2025年，2月5日*4.应用中等分子量的油溶性样品如油品、脂肪、芳烃等不同极性取代基的化合物结构异构体和几何异构体混合物的分离第72页，共136页，星期日，2025年，2月5日*第73页，共136页，星期日，2025年，2月5日*三、离子对色谱法

Ion-pairchromatography1.基本原理将一种或数种与样品离子电荷（A+）相反的离子(B-)（称为对离子或反离子）加入到色谱系统流动相中，使其与样品离子结合生成弱极性的离子对（中性缔合物）的分离方法。多为反相离子对色谱第74页，共136页，星期日，2025年，2月5日*第75页，共136页，星期日，2025年，2月5日*第76页，共136页，星期日，2025年，2月5日*2.固定相、流动相和离子对试剂固定相多为C18,C8反相键合相流动相是以水为主的缓冲液，或水-甲醇、水-乙腈等混合溶剂离子对试剂：四丁基铵正离子、十六烷基三甲基铵正离子，ClO4-，十二烷基磺酸根等第77页，共136页，星期日，2025年，2月5日*3.影响保留值的因素pH的影响：改善分离选择性的有效方法。反相中，对于阴离子的分离，pH下降，k减小。离子对试剂的性质与浓度：反相中，离子对试剂烷基链越长，疏水性越大，k越大。溶剂的极性：反相中，甲醇、乙腈等含量增加，洗脱强