高效液相色谱法原理及其应用.ppt

*********储液装置用于存储足够量的HPLC级的溶剂，流动相进入高压泵之前必须脱气。常用第四种。**储液装置用于存储足够量的HPLC级的溶剂****虽然流动相是影响组分的保留值的一个重要因素，但是保留值的大小的决定因素是组分与流动相和固定相分子间的作用力……**高压输液泵按性能可以分为两类，第一种是恒流泵，****按性能分类的第二种是：恒压泵*************五、可变波长紫外检测器是目前配置最多的检测器，可根据组分的最大吸收波长来设定检测波长。第55页，共71页，星期日，2025年，2月5日高效液相色谱仪的使用及维护使用HPLC级试剂和流动相清洁的仪器、流动相和样品，如果必要，进行过滤保证溶剂的相溶性如果必要，冲洗整个系统，去掉盐，防止污染在规定的pH范围内选用流动相对仪器的使用、维护和保养进行记录第56页，共71页，星期日，2025年，2月5日建立高效液相色谱分析方法的一般步骤通常在确定被分析的样品以后，要建立一种高效液相色谱分析方法必须解决以下问题：①根据被分析样品的特性选择适用于样品分析的一种高效液相色谱分析方法。②选择一根适用的色谱柱，确定柱的规格（柱内径及柱长）和所选用固定相（粒径及孔径）。第57页，共71页，星期日，2025年，2月5日③选择适当的或优化的分离操作条件，确定流动相的组成、流速及洗脱方式。④由获得的色谱图进行定性分析和定量分析。第58页，共71页，星期日，2025年，2月5日第三节高效液相色谱法应用示例盐酸左氧氟沙星滴眼液（5ml:15mg）含量测定测定方法：色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以醋酸铵高氯酸钠溶液（取醋酸铵4.0g和高氯酸钠7.0g，加水1300ml使溶解，用磷酸调节PH值至2.2）—乙腈（85:15）为流动相；检测波长为294nm。第59页，共71页，星期日，2025年，2月5日称取左氧氟沙星对照品、环丙沙星对照品和杂质E对照品各适量，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含左氧氟沙星0.12mg、环丙沙星和杂质E各6μg的混合溶液，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，左氧氟沙星峰的保留时间约为15分钟。左氧氟沙星峰与杂质E峰和左氧氟沙星峰与环丙沙星峰的分离度应分别大于2.0与2.5。第60页，共71页，星期日，2025年，2月5日供试品溶液的制备与测定精密量取本品1.0ml，置25ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称左氧氟沙星对照品适量，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释成每1ml中约含左氧氟沙星0.12mg的溶液，作为对照品溶液。取供试品溶液与对照品溶液各10ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算出供试品中C18H20FN3O4的含量，即得。本品含盐酸左氧氟沙星以左氧氟沙星（C18H20FN3O4）计，应为标示量的92.0%～108.0%。第61页，共71页，星期日，2025年，2月5日（1）配制系统适用性溶液，通过图谱得到相应峰之间的分离度。左氧氟沙星峰的保留时间左氧氟沙星峰与杂质E峰的分离度左氧氟沙星峰与环丙沙星峰的分离度第62页，共71页，星期日，2025年，2月5日（2）配制供试品溶液，进样，通过图谱得到主成分色谱图的峰面积，并计算平均值。供试品峰面积AX12第一针第二针供试品平均峰面积第63页，共71页，星期日，2025年，2月5日（3）配制对照品溶液，进样，通过图谱得到主成分色谱图的峰面积，并计算平均值。对照品峰面积AX12第一针第二针对照品平均峰面积第64页，共71页，星期日，2025年，2月5日（4）根据外标法计算公式，将对照品1的峰面积分别代入两份样品中求得样品含量。公式：供试品1-1%=供试品1-2%=第65页，共71页，星期日，2025年，2月5日（5）根据外标法计算公式，将对照品2的峰面积分别代入两份样品中求得样品含量。公式：供试品2-1%=供试品2-2%=第66页，共71页，星期日，2025年，2月5日（6）最后通过两份样品的平均结果得到盐酸左氧氟沙星滴眼液的含量。第67页，共71页，星期日，2025年，2月5日第68页，共71页，星期日，20