高效液相色谱法 (4).ppt

*应用及特点：液-固色谱法适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样对具有不同官能团的化合物和异构体具有较高的选择性。缺点：由于非线性等温吸附常引起拖尾现象。第31页，共45页，星期日，2025年，2月5日*三、离子对色谱法离子对色谱法是将一种(或多种)与溶质分子电荷相反的离子(称为对离子或反离子)加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物，从而控制溶质离子的保留行为。其原理可用下式表示：X+水相+Y-水相===X+Y-有机相式中：X+水相--流动相中待分离的有机离子）；Y-水相--流动相中带相反电荷的对离子（如氢氧化四丁基铵、氢氧化十六烷基三甲铵等）；X+Y-有机相---形成的离子对化合物。第32页，共45页，星期日，2025年，2月5日关于高效液相色谱法(4)第1页，共45页，星期日，2025年，2月5日*第一节概述

一、概述1、从GC的高速、高效和高灵敏度得到启发，20世纪70年代迅速发展。不挥发的有机物约占四分之三以上。2、80年代以来，HPLC飞跃发展文献量21%（89年）仪器销售量25%(12亿）（89年）应用领域拓展：化工、环保、临床、药品、生命等。第2页，共45页，星期日，2025年，2月5日*二、特点1.高压：一般可达150～350×105Pa。

2.高速：一般可达1～10ml/min。3.高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。4.高灵敏度：如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般几个微升。

5.适应范围宽：第3页，共45页，星期日，2025年，2月5日*三、HPLC与经典液相色谱

主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段1．经典LC：仅做为一种分离手段柱内径1~3cm，固定相粒径100μm且不均匀常压输送流动相柱效低（H↑，n↓）分析周期长无法在线检测2．HPLC：分离和分析柱内径2~6mm，固定相粒径10μm（球形，匀浆装柱）高压输送流动相柱效高（H↓，n↑）分析时间大大缩短可以在线检测第4页，共45页，星期日，2025年，2月5日*四、HPLC与GC相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测主要差别：分析对象的差别和流动相的差别1．分析对象GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品不可检测占有机物的20%HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型样品均可检测用途广泛，占有机物的80%第5页，共45页，星期日，2025年，2月5日*2．流动相差别GC：流动相为惰性气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用HPLC：流动相为液体流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用流动相种类较多，选择余地广流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相可以增大分离选择性第6页，共45页，星期日，2025年，2月5日*3．操作条件差别GC：加温操作HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）第7页，共45页，星期日，2025年，2月5日*第二节高效液相色谱仪采用高压输液泵、高效固定相和高灵敏度检测器等装置的液相色谱仪称为高效液相色谱仪。主要由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、微机控制及数据处理系统组成。第8页，共45页，星期日，2025年，2月5日*一、高压输液系统由储液灌、高压输液泵、梯度洗脱装置等部件组成，其中核心部件为高压输液泵。1.储液灌用于存放溶剂，一般由不锈钢、玻璃或聚四氟乙烯衬里为材料，容积一般为0.5~2L。溶剂使用前必须进行脱