高效液相色谱法 (9).ppt

*将一种或多种与溶质离子电荷相反的离子加入到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成疏水性的离子对化合物，从而控制溶质的保留行为的一种色谱分离方法。离子对色谱对一些生化试样，如核酸、核苷、儿茶酚胺类物质具有良好的分离效果。尤其是可以借助离子对的生成引入紫外吸收或荧光基团。三、离子对色谱法ionpairchromatography第30页，共43页，星期日，2025年，2月5日*1．分离原理固定相为非极性键合相，流动相为水溶液，于流动相中加入与待测离子X+相反电荷的离子Y-：第31页，共43页，星期日，2025年，2月5日关于高效液相色谱法(9)第1页，共43页，星期日，2025年，2月5日*一、高效液相色谱法的特点

featureofHPLC特点：高效、高压、高灵敏度、快速、应用广泛高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。第2页，共43页，星期日，2025年，2月5日*（一）固定相高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类，可分为刚性固体和硬胶两大类。刚性固体以二氧化硅为基质，可承受7.0×108～109Pa的高压，可制成直径、形状、孔隙度不同的颗粒。硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为3.5×108Pa。第3页，共43页，星期日，2025年，2月5日*由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲合力，并参与固定相对组分的竞争，因此，正确选择流动相直接影响组分的分离度。对流动相溶剂的要求是：（二）流动相（1）溶剂必须具有合适的极性和良好的选择性；能溶解样品但不与样品发生反应或聚合。（2）选用的溶剂与检测器匹配。第4页，共43页，星期日，2025年，2月5日*（3）高纯度。由于高效液相色谱灵敏度高，对流动相溶剂的纯度也要求高。不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”；（4）低粘度（粘度适中）；若使用高粘度溶剂，势必增高压力，不利于分离。第5页，共43页，星期日，2025年，2月5日*液相色谱仪第6页，共43页，星期日，2025年，2月5日*二、高效液相色谱的流程及主要部件

processandmainassemblyofHPLC1.流程图第7页，共43页，星期日，2025年，2月5日*2.主要部件高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和数据处理系统；此外还有一些附属设备，如梯度洗脱、自动进样装置。(1)高压输液系统（a）高压输液泵：主要部件之一，压力：150～350×105Pa。第8页，共43页，星期日，2025年，2月5日*(b)梯度洗脱装置（梯度淋洗）所谓梯度洗脱就是流动相含有两种或两种以上不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程序连续改变流动相的配比和极性，以此来改变被分离组分的容量因子k和选择性因子?，达到缩短分析时间和提高分离效果的目的。第9页，共43页，星期日，2025年，2月5日*第10页，共43页，星期日，2025年，2月5日*(2)进样系统通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：第11页，共43页，星期日，2025年，2月5日*(3)分离系统柱体为直型不锈钢管，内径2～6mm，柱长10～30cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。第12页，共43页，星期日，2025年，2月5日*在液相色谱中，有两种基本类型的检测器。一类是溶质性检测器，它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应，比如紫外、荧光等检测器。另一类是总体型检测器，它对试样和流动相总的物理或化学性质有响应，比如示差折光，电导检测器等。(4)检测系统第13页，共43页，星期日，2025年，2月5日*应用最广，对大部分有机化合物有响应。灵敏度高，10-6g/L；流通池可做的很小（1mm×10mm，容积8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感；可用于梯度洗脱。a.紫外检测器ultravioletphotometricdetector第14页，共43页，星期日，2025年，2月5日*b.光电二极管阵列检测器photodiodearraydetector紫外检测器的重要发展；由1024个二极管组成，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。第15页，共43页，星期日，2025年，2月5日*光电二极管阵列检测器获得的色谱图第16页，共43页，星期日，2025年，2月5日*c.荧光检测器fluorescencedetector高灵敏度、高选择性；对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉