高效液相色谱法 (2).ppt

高效液相色譜法第一節概述高效液相色譜法：以氣相色譜為基礎，在經典液相色譜實驗和技術基礎上建立的一種液相色譜法一、HPLC與經典LC區別二、HPLC與GC差別三、高效液相色譜儀流程圖四、特點一、HPLC與經典LC區別主要區別：固定相差別，輸液設備和檢測手段1．經典LC：僅做為一種分離手段柱內徑1~3cm，固定相粒徑100μm且不均勻常壓輸送流動相柱效低（H↑，n↓）分析週期長無法線上檢測2．HPLC：分離和分析柱內徑2~6mm，固定相粒徑10μm（球形，勻漿裝柱）高壓輸送流動相柱效高（H↓，n↑）分析時間大大縮短可以線上檢測二、HPLC與GC差別相同：兼具分離和分析功能，均可以線上檢測主要差別：分析對象的差別和流動相的差別1．分析對象GC：能氣化、熱穩定性好、且沸點較低的樣品，高沸點、揮發性差、熱穩定性差、離子型及高聚物的樣品不可檢測佔有機物的20%HPLC：溶解後能製成溶液的樣品，不受樣品揮發性和熱穩定性的限制分子量大、難氣化、熱穩定性差及高分子和離子型樣品均可檢測用途廣泛，佔有機物的80%續前2．流動相差別GC：流動相為惰性氣體組分與流動相無親合作用力，只與固定相作用HPLC：流動相為液體流動相與組分間有親合作用力，為提高柱的選擇性、改善分離度增加了因素，對分離起很大作用流動相種類較多，選擇餘地廣流動相極性和pH值的選擇也對分離起到重要作用選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動相可以增大分離選擇性3．操作條件差別GC：加溫操作HPLC：室溫；高壓（液體粘度大，峰展寬小）三、高效液相色譜儀流程圖1．貯液罐（濾棒，可濾去顆粒狀物質）2．高壓泵（輸液泵）3．進樣裝置4．色譜柱——分離5．檢測器——分析6．廢液出口或組分收集器7．記錄裝置續前四、HPLC的特點和應用“三高”“一快”“一廣”高柱效——n=104片/米，柱效高（遠高於一般LC）高靈敏度高選擇性分析速度快應用範圍廣泛（可分析80%有機化合物）第二節基本理論和條件選擇熱力學理論：塔板理論——平衡理論基礎動力學理論：速率理論——Vander方程一、塔板理論二、速率理論三、HPLC法中分離條件的選擇一、塔板理論二、速率理論（與GC對比）1.續前2）渦流擴散項及其影響next2.討論：1）流動相流速對HPLC板高的影響（與GC對比）next圖示back續前3）傳質阻抗項及其影響圖示三、HPLC法中分離條件的選擇1.固定相與裝柱方法的選擇：選粒徑小的、分佈均勻的球形固定相（dp≤10μm）首選化學鍵合相，勻漿法裝柱2.流動相及其流速的選擇：選粘度小、低流速的流動相——甲醇，1ml/min3.柱溫的選擇：選室溫250C左右第三節各類高效液相色譜法一、液固吸附色譜法（LSC）二、液液分配色譜法（LLC）三、化學鍵合相色譜法（BPC）一、液固吸附色譜法（LSC）

流動相為液體，固定相為固體吸附劑1．分離機制：利用溶質分子佔據固定相表面吸附活性中心能力的差異分離前提：K不等或k不等續前2．固定相：與LC比，固定相粒徑不同（10μm）（2）高分子多孔小球：YSG原理：吸附+分配蒹小孔凝膠作用特點：柱選擇性好，峰形好，柱效低適用：分離弱極性化合物（1）矽膠表孔矽膠（薄殼矽膠）全多孔矽膠無定形YWG5~6μm5×104球形YQG3~4μm8×108堆積矽珠YQG