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第8章高效液相色谱法.ppt

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第十章

液相色谱法一、影响分离的因素factorsinfluencedseparation二、分离类型的选择choiceofseparationtypes三、液相色谱的应用applicationofHPLC四、液相制备色谱preparativeliquidchromatography第四节

影响分离的因素与操作条件的选择highperformanceliquidchromatographfactorsinfluencedseparationandchoiceofoperationcondition第30页,共44页,星期日,2025年,2月5日一、影响分离的因素

factorsinfluencedseparation1.影响分离的因素与提高柱效的途径在高效液相色谱中,液体的扩散系数仅为气体的万分之一,则速率方程中的分子扩散项B/U较小,可以忽略不计,即:H=A+Cu故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同,如图所示。第31页,共44页,星期日,2025年,2月5日第8章高效液相色谱法第1页,共44页,星期日,2025年,2月5日一、液相色谱仪器

highperformanceliquidchromatograph第2页,共44页,星期日,2025年,2月5日液相色谱仪(2)第3页,共44页,星期日,2025年,2月5日液相色谱仪(3)第4页,共44页,星期日,2025年,2月5日液相色谱仪(4)第5页,共44页,星期日,2025年,2月5日二、高效液相色谱法的特点

featureofHPLC特点:高压、高效、高速高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。第6页,共44页,星期日,2025年,2月5日三、流程及主要部件

processandmainassemblyofHPLC1.流程第7页,共44页,星期日,2025年,2月5日2.主要部件(1)高压输液泵主要部件之一,压力:150~350×105Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(10μm),液体的流动相高速通过时,将产生很高的压力,因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性(动画)第8页,共44页,星期日,2025年,2月5日(2)梯度淋洗装置外梯度:利用两台高压输液泵,将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室,混合后进入色谱柱。内梯度:一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。第9页,共44页,星期日,2025年,2月5日(3)进样装置流路中为高压力工作状态,通常使用耐高压的六通阀进样装置,其结构如图所示:第10页,共44页,星期日,2025年,2月5日(4)高效分离柱柱体为直型不锈钢管,内径1~6mm,柱长5~40cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。第11页,共44页,星期日,2025年,2月5日(5)液相色谱检测器a.紫外检测器应用最广,对大部分有机化合物有响应。特点:灵敏度高;线形范围高;流通池可做的很小(1mm×10mm,容积8μL);对流动相的流速和温度变化不敏感;波长可选,易于操作;可用于梯度洗脱。第12页,共44页,星期日,2025年,2月5日第八章

高效液相色谱法一、液-固吸附色谱liquid-solidadsorptionchromatograph二、液-液分配色谱liquid-liquidpartitionchromatograph三、离子交换色谱ion-exchangechromatograph四、离子色谱ionchromatograph五、离子对色谱ion-pairchromatograph六、排阻色谱size-exclusionchromatograph七、亲和色谱(AC)Affinitychromatograph第二节

主要分离类型与原理highperformanceliquidchromatographbasicprincipleandmainseparatingtypes第13页,共44

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